ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ РНК-ЗАВИСИМОЙ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ ВИРУСА ГЕПАТИТА С С РНК-МАТРИЦАМИ

  • Published on
    06-Apr-2017

  • View
    215

  • Download
    3

Embed Size (px)

Transcript

<ul><li><p>88 | ActA nAturAe | 1 2009</p><p> 577.214.3</p><p> - - -. . , . . , . . , . . , . . # . . . , # e-mail: kochet@eimb.ru</p><p> - . - , , () , 170 . , , - - (-, nS5B). - ~67 - c- - (21 ..). - -, - (de novo) [1]. in vitro -, , - (r)-(ru), . -, -, -, H502 e18, - [2].</p><p> E. coli - , 6 / , - , - ( - ) [3]. , [4]; -</p><p> - - [5]. - (, (-)IreS, 3-- (-) ) . - - , - . , - . - , .</p><p>- Escherichia coli, 21-2-5B55, [3]. , - - , - , , ni-ntA- . - [32P]-utP (rA)-(ru) - (-)IreS . - - - . </p></li><li><p> 1 2009 | ActA nAturAe | 89</p><p> , de novo - , , .</p><p> - (1 /, Sigma, ) (2-3 -/) , - nH4cl 1 . 10 % - (Serva, ) 1 %, 30-40 4 , - 3-5000 / 3 . 80 % 4 . 10 000 / 4 20 , - , 20 mM -Hcl pH 7.5, 350 mM nacl, 5 % , 1 mM -, 1 mM (PMSF), 1 / (Sigma, ). - ( 1 ) 500 -. ni-ntA , . - 50 mM . 200 mM . - 200 100 ( -Hcl 20 mM pH 7.5, nacl 350 mM, 10 % , 0.5 mM , 10 mM -; , 50 % ) -. [6].</p><p> , [3]. </p><p> - - 4- (Fermentas, ) [32P]-AtP -. Micro-spin G-50 (Ge Healthcare, ). </p><p> - . 48- - (Bio-rad, ). - </p><p> . -, 50 mM HePeS-KOH pH 7.5, 5 mM Mgcl</p><p>2, </p><p>10 mM -. 500 mM nacl. 4 30 , - . 2 nM. - 40-60 - Storage Phosphor Screen Phosphor Imager (Packard, ). total Lab Origin 7.0. </p><p> - - , , - . - , , in vitro -, . , - - , . , -, - -, , - . , - [32P]-AtP , , , 5- -, , - 12 60 (. 1 ). - , - (. 1). , , nacl ( 1.5 ) -, ( ). </p><p> - , -</p><p>. 1. - -, , - [32 P]-ATP ( 1 , 2 ) (); - - , , - [32 P]-ATP ( 1 , 2 , 3 , ) (); - , 1 % ( 1 , 2 , 3 ) ();. , -, </p></li><li><p>90 | ActA nAturAe | 1 2009</p><p>. 2. - . () - ; () - . : WT , DM </p><p> . - - , . , , - - - . 7 - [7].</p><p> - - , - (DM) - (H502L, e18A), - [2], - (r222A c223A), , , - . - , , - (9.2 / 1 ). [2], (H502L, e18A) - - . - , , (20.4 / 1 ). </p><p> , , . - 3-5 / , - 1 /. , , -, - , -. , - -20 , - -85 ( -). .</p><p> - </p><p>in vitro . (rA20) (-rA) , (-IreS). . 2 . 1 - . </p><p> - - [8], - , [9]. . 1, - Wt DM - (rA20) , .. - - . - (Wt DM) , . - , , -, 20 , -, - -. , .</p><p> , - - , , -. - , - . </p><p> 1. Bressanelli S., tomei L., roussel A., Incitti I., Vitale r.L., Mathieu M., De Francesco r., </p><p>rey F.A. // Proc. natl. Acad. Sci. uSA. 1999. V. 96. P. 13034-130392. Qin W., Luo H., nomura t., Hayashi n., Yamashita t., Murakami S. // J Biol chem. 2002. </p><p>V. 277. 3. . 2132-2137. 3. Ivanov A.V., Korovina A.n., tunitskaya V.L., Kostyuk D.A., rechinsky V.O., </p><p>Kukhanova M.K., Kochetkov S.n. // Prot. expr Purif. 2006. V. 48. 1. . 14-23. 4. Hengen P. // trends Biochem Sci. 1995. Jul;20(7):285-6.5. Zhong, W., Ferrari, e., Lesburg, c.A., Maag, D., Ghosh, S.K., cameron,c.e., Lau, J.Y., </p><p>Hong Z. // J.Virol., 2000. V. 74. P. 9134-9143.6. Bradford M.M. // 1976 May 7;72:248-54.7. tunitskaya V.L., Akbarov A.Kh., Luchin S.V., Memelova L.V., rechinsky V.O., </p><p>Kochetkov S.n. // eur J Biochem. 1990. V. 191. 1. . 99-103.8. .., .. ., , 1998. 720 .9. Wang Q.M., Hockman M.A., Staschke K., Johnson r.B., case K.A., Lu J., Parsons S., </p><p>Zhang F., rathnachalam r., Kirkegaard K., colacino J.M. //J Virol. 2002 Apr;76(8):3865-72. </p><p>. 1. , -. : WT , DM , n , </p><p>WT DM WT DM</p><p>rA20</p><p> ()</p><p> 57,86 1,82 - 17,34 6,62 2,73 0,31</p><p>n 0,59 0,14 - 1,08 0,21 1,38 0,19</p><p>-rA</p><p> ()</p><p> - - 0,81 0,12 1,03 0,13</p><p>n - - 0,97 0,21 0,83 0,12</p><p>(-)IreS</p><p> ()</p><p> &gt;3000 &gt;3000 7,80 1,21 14,69 2,94 </p><p>n - - 1,24 0,16 1,20 0,18</p></li></ul>

Recommended

View more >