363lo lectura] [Modo de compatibilidad]) ?· FLUORESCENTE CON LA TINCIÓN DE GRAM. COMPARACIÓN DE LAS…

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  • TEMA 9

    MTODOS PTICOS PARA EL DIAGNSTICO DE LABORATORIO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS

  • INDICE DE CONTENIDOS

    Introduccin Tipos de microscopa ptica

    Microscopa de campo claro Microscopa de campo oscuro Microscopa de contraste de fases Microscopa de fluorescencia

    Examen microscpico de material fresco Examen microscpico de material fresco levemente modificado

    Hidrxido de potasio al 10 % Tinta china (marca Pelikan) o nigrosina Lugol Lugol Anticuerpos

    Microscopa ptica Tincin de gram Tincin cido alcohol resistente

    Microscopa de fluorescencia. Fundamento Colorantes para la microscopa de fluorescencia y aplicaciones

    Auramina-Rodamina Naranja de acridina Blanco de calcofor Isotiocianato de fluorescena

    Inmunofluorescencia Microscopa electrnica

    Barrido Transmisin

  • TIPOS DE MICROSCOPA

    MICROSCOPA PTICA MICROSCOPA DE CAMPO CLARO

    MICROSCOPA DE CAMPO OSCURO

    MICROSCOPA DE CONTRASTE DE FASES

    MICROSCOPA DE FLUORESCENCIA INMUNOFLUORESCENCIA

    MICROSCOPA ELECTRNICA TRANSMISIN

    BARRIDO

  • TCNICAS DE OBSERVACIN DE MUESTRAS SIN TEIR

    MONTAJE DIRECTO OBSERVACIN DE MOVILIDAD OBSERVACIN DE ESPIROQUETAS OBSERVACIN EN CAMPO OSCURO O

    CONTRASTE DE FASES. (En microscopio de campo claro con el condensador bajo y el diafragma semi-cerrado)

    TCNICA DE LA GOTA PENDIENTE MOVILIDAD OBSERVACIN EN CAMPO OSCURO O

    CONTRASTE DE FASES. (En microscopio de campo claro con el condensador bajo y el diafragma semi-cerrado)

  • OBSERVACIN DE Treponema pallidum ENCAMPO OSCURO O CONTRASTE DE FASES

  • PREPARACIONES LEVEMENTE MODIFICADAS

    MONTAJE EN KOH 10% AZUL DE LACTOFENOL PARAOBSERVACIN DE HONGOS

    TINTA CHINA O NIGROSINA OBSERVACIN DE HONGOS

    MONTAJE EN YODO (LUGOL) OBSERVACIN DE PARSITOS

    REACCIN DE NEUFELD QUELLUNG PARA DETECCIN DE Streptococcus pneumoniae Y Haemophilus influenzae tipo b capsulado

  • Observacin de hongos

  • Observacin de huevos y parsitos

  • MICROSCOPA DE CAMPO CLARO. OBSERVACIN DE PREPARACIONES TEIDAS

    Tincin de Gram

    Gram positivos y Gram negativos

    Morfologa

    AgrupacionesAgrupaciones

  • Ejemplos de bacterias y levaduras teidas

    Cocos gram positivos en extendidos directos de pus

  • Ejemplos de bacterias gram positivas y gram negativas

  • OBSERVACIN DE BAAR EN EXTENDIDOS DIRECTOS

    Tincin cido alcohol resistente:

    Mtodo en caliente (Ziehl-Nielsen)

    Mtodo en fro (Kinyoun)

    Micobacterias, Nocardia, algunos Micobacterias, Nocardia, algunos hongos como Cryptococcus neoformans

  • PRINCIPIO DE LA MICROSCOPA DE FLUORESCENCIA

  • Principales fluorocromos utilizados

    Naranja de acridina colorante vital

    Auramina-Rodamina micobacterias

    Blanco de calcoflor hongos

    Isotiocianato (inmunofluorescencia)

    de fluorescenade fluorescena

  • COMPARACIN DE LA TCNICA FLUORESCENTE CON LA TINCIN DE GRAM

  • COMPARACIN DE LAS TCNICAS DE FLUORESCENCIA Y CIDO-ALCOHOL RESISTENCIA PARA LA DETECCIN DE MICOBACTERIAS

  • Ventajas de la fluorescencia

    Ventajas de la fluorescencia Mayor sensibilidad

    Microscopio 25x 40x

    Especificidad en la tincin de auramina- Especificidad en la tincin de auramina-rodamina

    Naranja de acridina colorante vital (permite ver si son viables)

  • PRINCIPIO DE LA INMUNOFLUORESCENCIA

  • DETECCIN DE LEGIONELLA Y BORDETELLAMEDIANTE INMUNOFLUORESCENCIA

  • DETECCIN DE YERSINIA PESTIS

    Deteccin de Yersinia pestis mediante inmunofluorescencia

  • DETECCIN DE VIRUS POR INMUNOFLUORESCENCIA

    Deteccin de CMV mediante inmunofluorescencia directa

  • MICROSCOPA ELECTRNICA

    MICROSCOPA PTICA HAZ DE LUZ LENTES MUESTRAS INTACTAS O

    FIJADAS AMPLIFICACIN 1000X

    MICROSCOPA ELECTRNICA

    HAZ DE ELECTRONES CAMPOS

    MAGNTICOS

    TRANSMISIN BARRIDO

    MUESTRAS FIJADAS E INCLUIDAS EN RESINACORTES ULTRAFINOS (TRANSMISIN)AMPLIFICACIN 100.000X

    MUESTRAS FIJADAS SOBRE UNA SUPERFICIEBARRIDO DEL HAZ SOBRE LA SUPERFICIEAMPLIFICACIN 100.000X

  • MICROSCOPA ELECTRNICA DE BARRIDO

  • DETECCIN DE PARTCULAS DE VIRUS POR MICROSCOPA ELECTRNICA

  • USOS MS FRECUENTES DE LOS DIFERENTES TIPOS DE MICROSCOPA

    GRUPO DE MICROORGANISMO

    MICROSCOPA DE CAMPO CLARO

    MICROSCOPA DE FLUORESCENCIA

    MICROSCOPA DE CAMPO OSCURO

    MICROSCOPA ELECTRNICA

    BACTERIAS + + +/- -

    HONGOS + + - -+ + - -

    PARSITOS + + - -

    VIRUS - + - +

  • Caractersticas clave Aspecto de la imagen Principales aplicaciones

    Microscopia ptica

    Campo claro El contraste se logra por absorcin. Imagen clara. Las muestras requieren tincin. Para

    observar organismos completos.

    Contraste de fases El contraste se consigue por

    interferencia; las diferencias en

    el indice de refraccin cambian

    la fase de la luz

    Imgenes claras y detalladas rodeadas

    de un balo.

    No requiere tincin; se pueden observar

    preparaciones en fresco de

    clulas vivas.

    Movilidad

    Campo oscuro Solamente la luz dispersada por la

    muestra entra en el objetivo,

    producindose un contraste

    elevado.

    Imagen brillante contra un fondo

    oscuro.

    Para observar clulas vivas o flagelos

    demasiado finos para la

    microscopia de contraste de

    fases; pocos detalles internos.

    CARACTERSTICAS CLAVE DE LOS DIFERENTES TIPOS DE MICROSCOPA UTILIZADOS EN MICROBIOLOGA CLNICA

    elevado. fases; pocos detalles internos.

    Movilidad.

    Fluorescencia Se basa en la capacidad de emitir luz

    visible que tienen los

    especimenes fluorescentes

    cuando se les ilumina con luz uv.

    Especimenes muy coloreados

    (luminosos) contra un fondo

    oscuro.

    Utilizando anticuerpos fluorescentes se

    pueden identificar tipos

    especificos de microorganismos

    en una mezcla compleja.

    Microscopa electrnica

    Transmisin (MET) Hace pasar un haz de electrones a travs

    de la preparacin, produciendo

    un gran aumento til

    Imgenes muy ampliadas con gran

    detalle.

    Para observar virus y la ultraestructura

    celular. No se pueden observar

    organismos vivos porque las

    preparaciones ban de ser

    totalmente desecadas.

    Barrido (MEB) Barre los especimenes con un chorro de

    electrones, produciendo la salida

    de electrones secundarios que

    crean una seal, que, a su vez,

    genera una imagen por

    ordenador.

    Imagen tridimensional. Para ver estructuras de organismos

    intactos, e incluso estructuras

    internas con detalles reales. Las

    muestras han de ser desecadas,

    por tanto, no se puede aplicar a

    organismos vivos