4. DNA Rekombinan (28 Sld)

  • Published on
    02-Oct-2015

  • View
    220

  • Download
    2

Embed Size (px)

DESCRIPTION

4. DNA Rekombinan (28 Sld)

Transcript

  • TEKNOLOGI DNA REKOMBINAN: Rekayasa genetik (genetic engineering)/ kloning DNA.

    Teknik penggabungan molekul2 DNA secara in-vitro shg diperoleh molekul DNA rekombinan sesuai dg yg diharapkan.

    Paul Berg (awal tahun 70-an): Penyambungan molekul DNA secara Paul Berg (awal tahun 70-an): Penyambungan molekul DNA secara in-vitro.

    Keuntungan: Mengatasi kendala inkompatibilitas genetik yg sering dihadapi pada pemuliaan konvensional.

  • DNA VEKTOR(Plasmid)

  • TAHAPAN DASAR DARI TEKNOLOGI DNA REKOMBINAN

    Isolasi molekul DNA (gen) target.

    Pemotongan DNA target dg enzim endonuklease restriksi.

    Penyambungan molekul DNA terget ke dlm molekul DNA vektor dg enzim DNA ligase (menghasilkan DNA rekombinan).enzim DNA ligase (menghasilkan DNA rekombinan).

    Transformasi sel inang dg DNA rekombinan.

    Analisis/konfirmasi keberadaan DNA rekombinan di dlm sel inang.

    Karakterisasi fungsional gen yg diklon.

  • ISOLASI DNA

    Isolasi DNA genom, lalu dipotong dg enzim.

    Isolasi mRNA, lalu membuat cDNA (complementary DNA).

    Membuat gen sintetik.

    Melakukan amlifikasi DNA dg teknik PCR (Polymerase Chain Reaction).

  • ISOLASI mRNA

  • PCR

  • Restriction enzymes (endonucleases).

    Restriction enzymes are produced by bacteria as a defense against

    PEMOTONGAN DNADENGAN ENZIM ENDONUKLEASI RESTRIKSI

    Restriction enzymes are produced by bacteria as a defense against viruses.

    These enzymes cut DNA at specific base sequences called recognition sites.

  • Also called restriction enzymes Occur naturally in bacteria Hundreds are purified and available commercially Named for bacterial genus, species, strain, and type

    Restriction endonucleases

    Named for bacterial genus, species, strain, and type

    Example: EcoRI

    Genus: EscherichiaSpecies: coliStrain: R

  • PEMOTONGAN DNA DENGAN ENZIM ENDONUKLEASI RESTRIKSI

  • An EcoR1 restriction enzyme

  • LIGASI DNA

  • TRANSFORMASI E. Coli

  • Analisis/konfirmasi keberadaan DNA rekombinan di dlm sel inang

    Karakterisasi fungsional gen yg diklon

  • Analisis/konfirmasi keberadaan DNA rekombinan di dlm sel inang

  • Karakterisasi fungsional gen yg diklon

  • PEMANFAATAN TEKNOLOGI DNA REKOMBINANDALAM PROTEKSI TANAMAN