A.G. Bio-Espace 2009

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Objectif : 1/ Accroitre une population existante de lapins de garenne. 2/ Crer une population de lapins sur un territoire qui en est dpourvu. A.G. Bio-Espace 2009. - PowerPoint PPT Presentation

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  • A.G. Bio-Espace 2009 Objectif :

    1/ Accroitre une population existante de lapins de garenne.

    2/ Crer une population de lapins sur un territoire qui en est dpourvu.

  • Myxomatose et VHD, provoquent 88% de mortalit chez les adultes et 99% chez les juvniles. Marchandeau et al, Office National de la Chasse. J. Wildlife Diseases 1998 34(3), 429-35Notre approche : Vacciner les lapins contre la myxo et la VHD sans avoir les capturer

  • MyxomatoseRevenons sur quelques diapositives de lAG 2008.

  • 4-6 Mars 2008 le Dr Brian Cooke visite le laboratoire de Bio-Espace

  • 4-6 Mars 2008 Visite du Dr Brian Cooke

  • 4-6 Mars 2008 Visite du Dr Brian CookeIl visite un terrain sur lequel des puces/BE4, sont lches.

  • 4-6 Mars 2008 Visite du Dr Brian CookeLe plateau du Larzac

  • 4-6 Mars 2008 Visite du Dr Brian CookeLe Dr Cook est. tonn de ce quil voit.

  • 4-6 Mars 2008 Visite du Dr Brian CookeConclusion du Dr Cooke : Votre levage de puces est remarquable. Vous produisez plus de 4 millions de puces/an avec 8 lapins. A lorigine de lintroduction des puces en Australie nous en avons produit 1 million, et ce ne fut pas trs facile mme avec beaucoup plus de lapins.

    Ici sur le Larzac je considre quil y a entre 10 et 15 lapins / ha.

    Lefficacit des puces-BE4 sur le terrain est donc vidente.

  • Rappelons pourquoi lefficacit du couple puces-BE4 est vidente sur le terrain.

  • Paramtre n 1

    Le virusVaccination contre la myxomatose

  • Les virus de la myxoDans la nature, le virus de la myxomatose a spontanment volu de la virulence I la virulence V (FENNER 1957) ATTENTION le taux de mortalit donn dans ce tableau est mesur sur des populations de lapins domestiques nayant jamais rencontr la myxomatose Dans la nature ces virus ne sont pas galement rpartis.

  • Dans la nature ces virus ne sont pas galement rpartis.Un quilibre stablit entre les virus de virulence I, II, III, IV, et V (FENNER et ROSS ,1994).

  • Rpartition des virus I et IIPour les virus de virulence I et II - Les lapins meurent vite (transmission courte) Mme sils sont bien transmis par les insectes, Au total ces virus sont peu prsents.

  • Rpartition des virus III et IVpour les virus de virulence III et IV - le temps de survie des lapins est plus long - La transmission par les insectes est bonne, Au total: ils sont trs prsents.

  • Rpartition du virus Vpour le virus de virulence V - le temps de survie des lapins est trs long jusqu la gurison - Mais la transmission par les insectes est trs mauvaise, Au total: ils sont trs peu prsents.

  • Paramtre n 2 Ce paramtre nest que rarement pris en considration. Il est pourtant bien rel et document. FENNER 1983-1994Rsistance des lapins la myxomatose

  • Apparition de la rsistanceEvolution de la rsistance d'une population de lapins sauvages aprs 7 pizooties de myxomatose (7 ans).Aprs chaque pizooties, les jeunes lapins (srongatifs) sont soumis un virus d'preuve de virulence III. (FENNER 1983 et 1994) Il est ainsi clair quune population de lapins soumise une myxomatose annuelle a un faible taux de mortalit avec des signes cliniques faibles.Au-del de 6, 7 ans il ny a plus dvolution. (la rsistance naugmente plus.)

  • La rsistance est fonction de la force des virus.

    Lorsquune population de lapins est soumise une pression annuelle de la myxomatose de virulence I, II, III, IV, la rsistance de cette population augmente jusqu un maximum atteint en 6, 7 ans. FENNER (1983 et 1994).

    Noter que les virus trop attnus ne donnent pas de rsistance aux lapins.

    Mais attention en l'absence de pression myxomateuse cette "rsistance" acquise en 6, 7 ans, se perd en 3 ans. (SOBEY- Communication personnelle, et Bio-Espace)

  • La rsistanceEn rsum

  • Fonctionnement de la myxomatoseCinq paramtres sont en interaction dans le fonctionnement de la myxomatose (SEYMOUR, 1992) :

    1 - la densit des lapins,2 - les ressources alimentaires,3 - les vecteurs et leur nombre (puces, moustiques...) 4 - la virulence des virus,5 - et la rsistance des lapins.

  • BIOESPACEla rsistance des lapins est le paramtre cl du dclenchement et du dveloppement de la myxomatose (SEYMOUR, 1992)

  • BIOESPACE- Si la rsistance est trs forte, la maladie ne se dclenche pas (SEYMOUR, 1992)

    - Si, la rsistance est trs faible, la maladie se dclenche toujours (SEYMOUR, 1992)

  • Crer et maintenir la rsistanceSi les chasseurs veulent accrotre une population de lapins sauvages il faut tout prix quils conservent la rsistance la myxomatose, et si cette rsistance nexiste pas il faut quils la crent.

    La solution, est dutiliser le virus de virulence IV, et de le dlivrer par les puces.

    Avec le Virus de virulence IV, si les lapins ont une bonne rsistance, et si ce virus est dlivr par les puces, on vaccine sans mortalit, et on maintient la rsistance.

  • Rsistance-Rsistance-RsistancePouvoir pathogne de la souche BE4 sur lapins domestiques et sauvages. 1/ vidence du rle de la rsistance, 2/ Rle trs positif de la transmission par les puces.

  • 4-6 Mars 2008 Visite du Dr Brian CookeVoil donc les raisons pour lesquelles le Dr Cook est. tonn de ce quil voit.

  • Conclusion cot myxoa marche Il suffit dappliquer.

  • Vaccination contre la VHDDeux programmesRecombinants Myxo/VHD.Virus VHD naturellement attnu.

  • Recombinant Myxo/VHDIl ne faut pas vouloir protger une population contre la VHD, et la laisser mourir de la myxomatose.En consquence il faut que dans le recombinant myxo/VHD, la partie myxo soit aussi virulente que le BE4 seul.

    La diapo suivante montre la raction obtenue par injection de BE4 sur des lapins domestiques 10-11 J aprs linjection. Cest cette raction quil faudrait avoir avec un recombinant Myxo-VHD

  • Exemple de raction au BE4 sur des lapins domestiques 10 et11jours aprs linjection.10 A11 A10 B11 B

  • Rsultats antrieurs autres que ceux de BioEspace1/ Quant on recombine un virus la virulence du porteur dcroit. (toujours)

    2/ Si on part dun porteur myxo moins virulent que force IV, le recombinant sera forcment encore moins virulent et la rsistance ne sera pas au rendez vous.

    3/ Toutes les constructions prcdentes sont dlibrment utilis (pour des raisons rglementaires) un porteur moins virulent que force IV (soit le SG33, soit un virus de force V) donc les recombinants obtenus ne sont pas assez virulents.

  • Virus de la Myxomatose 2OO nm ADN double brin161 773 Paires de basesVirus de la VHD40 nm ARN simple brin 7437 basesLes deux virus qui doivent tre recombins.Structure RXGnome Myxo (161 773 pb) Gnome VHD (7437 b)Gne VP60 (2074 b) gne TK (non essentiel) 500 pb

  • TK gnome du virus de la myxomatose gne TK (non essentiel) 500 pb TK/2TK/2Gnome BE4 recombinantgne VP60(2,1kb)+ Gne Lac Z (4000pb)LacZ introduit pour pouvoir isoler le recombinant via gal La premire approche (Yi-Montpellier) a consist introduire le gne de la VP60, au centre du gne TK.Pour pouvoir isoler le recombinant du milieu de culture il a introduit un gne supplmentaire (lacZ de 4000 pb) qui code pour une protine gal laquelle colore en bleu les cellules dans lesquelles le recombinant se multiplie.

    Ci-dessous: le gnomes naturel du virus myxo et du virus recombin (zoom dans rgion TK), Premire approche de recombinant virulent

  • Plages de multiplication du virus recombinant BE4-VP60-LacZ, dans lesquelles on voit (au microscope) des plages colores en bleues par la gal. Ce bleu indique que des virus recombinantsCe sont multiplis dans ces cellules.La slection de ces plages bleu est longue et la purification fastidieusePlage de multiplication du virusmyxomateux BE4 sur cellules RK13

  • rsultatsLe recombinant obtenu (BE4-TK1/2-VP60-LacZ-TK1/2) inocul des lapins provoque le dveloppement danticorps contre la myxo et la VHD.

    TK/2VP60=2100pb+ LacZ = 4000pbGnome BE4 recombinantMais les taux danticorps sont faibles, et les symptmes trs lgers. Rien voir avec les symptmes provoqus par le BE4 seul.Conclusion ce recombinant nest pas assez virulent.Hypothse : le gne du LacZ (4000 pb) perturbe trop le gnome du virus myxo porteur. TK/2

  • Recherche dun deuxime recombinant. TK/2VP60=2100pbGnome BE4 recombinantYi Li et al ont construit des cellules RK13 spciales (RK13-TK- ) pour cultiver ce nouveau recombinant. (voir AG Bio Espace 2008)Mais larrive ce nouveau recombinant na pas voulu pousser sur ces cellules. (Donc chec, au moins temporaire. Le Pr LI cherche comprendre pourquoi a ne pousse pas) TK/2Objectif supprimer le LacZ : BE4-TK1/2-VP60-TK1/2. Yi Li et al ont construit les outils pour obtenir ce recombinant. (noter quil ne devait plus exprimer la -gal pour le reconnaitre)

  • Recherche dun troisime recombinantRemplacer le LacZ par le gne GFP (Green Fluorescent Proteine) bien plus court (1000 pb) : le recombinant vis est le BE4-TK1/2-VP60-GFP-TK1/2.TK/2VP60=2100pbGnome BE4 recombinantLe Pr Li et al construisent ce recombinant. (au lieu dexprimer la -gal bleu, il exprimera la green fluorescent protein)Ce recombinant devraient pouvoir tre cultiv dans des cellules RK13 normales. A larrive ce nouveau recombinant qui devrait tre obtenu dans les mois qui viennent pourrait tre plus virulent que celui obtenu avec la gal.TK/2 GFP1000pb

  • Recherche dun quatrime recombinantUtiliser un gne non essentiel autre que le TK. le Pr Li a identifi ce second gne non essentiel pour le virus de la myxo. NE/2VP60=2100pbGnome BE4 recombinantA partir de cet autre gne (non essentiel, (NE) il pourra construire un autre recombinants BE4-NE1/2-VP60-GFP-NE1/2. Cette construction sera entreprise si les