Agar Caldo Urea

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    25-Nov-2015

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<p>AGAR CALDO UREA</p> <p>Se utiliza para la valoracin de la produccin de ureasa por algunas enterobacterias. Este medio contiene glucosa, peptona, urea y rojo de fenol. Las bacterias que producen ureasa a partir de la urea dan lugar al carbonato de amonio y el indicador se vuelve rojo prpura. Obsrvese en la tabla de reacciones bioqumicas que solo el gnero Proteus da esta reaccin positiva. Utilizacin de urea como fuente de carbono. La enzima ureasa hidroliza la urea en amoniaco y anhdrido carbnico, ante la variacin del pH por la alcalinizacin el indicador Rojo Fenol, vira de amarillo claro a ligeramente rosado o rosa mexicano. Se utiliza solamente para la deteccin de la ureasa en especies del gnero Proteus. Si los nutrientes suministrados por el extracto de levadura se consumen antes que la bacteria muestre crecimiento no podr determinarse con exactitud su capacidad de hidrolizar urea. Pero si es capaz de hidrolizar la urea, pero no utilizar el amoniaco como fuente de nitrgeno, no se produce crecimiento y puede dar un falso negativo.Christensen Medio (Urea Agar Base).</p> <p>Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad uresica.Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.</p> <p>FundamentoEn el medio de cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el rojo de fenol es el indicador de pH.Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo. En este medio, la fermentacin de la glucosa activa la enzima ureasa, acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.ResultadosMicroorganismoActividad uresicaColor del medio</p> <p>Proteus mirabilis ATCC 43071PositivaRojo-Rosado</p> <p>K. pneumoniae ATCC 700603Positiva dbilRojo-Rosado</p> <p>Escherichia coli ATCC 25922NegativaAmarillo</p> <p>S. flexneri ATCC 12022NegativaAmarillo</p> <p>S. typhimurium ATCC 14028NegativaAmarillo</p> <p>Limitaciones-Bacterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter, viran al color rojo-rosado de todo el medio de cultivo luego de varios das de incubacin.-No calentar o sobrecalentar el medio de cultivo porque la urea se descompone facilmente.</p> <p>Caractersticas del medioMedio preparado: amarillo</p> <p>SIM Medio</p> <p>Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.</p> <p>FundamentoEl triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.</p> <p>esultados</p> <p>Cepas mviles:producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la lnea de siembra.Cepas inmviles:el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra.Cepas SH2positivas:ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio.Cepas SH2negativas:el medio permanece sin cambio de color.Cepas indol positivas:desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovacs o de Erlich.Cepas indol negativas:sin cambio de color.</p> <p>MicroorganismoMovilidadIndolProduccin decido sulfhdrico</p> <p>E. coli ATCC 25922++-</p> <p>K. pneumoniae ATCC 700603---</p> <p>P. mirabilis ATCC 43071+-+</p> <p>S. typhimurium ATCC 14028+-+</p> <p>S. enteritidis ATCC 13076+-+</p> <p>S. flexneri ATCC 12022---</p> <p>Limitaciones-En las bacterias aerobias estrictas, que slo crecen en superficie, la movilidad puede ser difcil de observar.-Algunas bacterias productoras de melanina como M. morganii, pueden dar un color parduzco, que no debe confundirse con el color negro debido a la produccin de cido sulfhdrico.</p> <p>Caractersticas del medioMedio preparado: mbar.</p> <p>Simmons Citrato Agar</p> <p>Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa.</p> <p>FundamentoEn el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.</p> <p>Resultados</p> <p>-Positivo:crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.-Negativo:el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.</p> <p>MicroorganismoCitrato permeasaColor del medio</p> <p>Klebsiella pneumoniae ATCC 700603PositivoAzul</p> <p>S. typhimurium ATCC 14028PositivoAzul</p> <p>E. coli ATCC 25922NegativoVerde</p> <p>S. flexneri ATCC 12022NegativoVerde</p> <p>Limitaciones-Si se usa un inculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del pico del verde al amarillo-amarronado.Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la visualizacin azul de un resultado positivo.-Inculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.-Cuando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a partir del mismo cultivo, se debe esterilizar la aguja de inoculacin antes de inocular la prueba del citrato o sino inocularla primero. Cualquier arrastre de materia orgnica puede originar resultados falsos positivos.</p> <p>TSI Agar</p> <p>Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.</p> <p>FundamentoEn el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.</p> <p>Resultados1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares.4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico.</p> <p>MicroorganismoPico/FondoProduccin de gasProduccin decido sulfhdrico</p> <p>E. coli ATCC 25922A/A+-</p> <p>K. pneumoniae ATCC 700603A/A+-</p> <p>P. mirabilis ATCC 43071K/A++</p> <p>S. typhimurium ATCC 14028K/A-+</p> <p>S. enteritidis ATCC 13076K/A++</p> <p>S. flexneri ATCC 12022K/A--</p> <p>P. aeruginosa ATCC 27853K/K--</p> <p>A: cidoK: alcalino</p> <p>Caractersticas del medioMedio preparado: rojoAgar TSI(Triple azucar hierro)</p> <p>Determina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono especfico incorporado en un medio de crecimiento bsico, con produccin o no de gases, junto con la determinacin de posible cido sulfhdrico.El agar TSI es un medio diferencial que determina tanto la fermentacin de los hidratos de carbono y la produccin de cido sulfhdrico. Las bacterias pueden utilizar cualquiera de los sustratos incorporados en el medio y ser metabolizados, caractersticas que son utilizadas para la diferenciacin de stas, principalmente para las Enterobacterias.Este medio contiene lactosa con una concentracin de 1% y glucosa 0.1%, lo cual permite la observacin de la fermentacin de uno o de ambos carbohidratos por parte de las bacterias, adems de la produccin de gas y de cido sulfhdrico.La fermentacin es un proceso que se lleva a cabo en condiciones aerbicas (pico de flauta) y anaerbicamente (capa inferior). En el pico de flauta la glucosa (monosacrido) es catabolizada inicialmente por medio del ciclo anaerbico de Embden-Meyerhof, utilizado tanto por los aerobios como por los anaerobios para dar cido pirvico, y posteriormente ste ser degradado a travs del ciclo de Krebs para dar CO2, H2O y energa.Por otra parte la lactosa (disacrido) ser primero degradada a sus monosacridos correspondientes (glucosa y galactosa).</p> <p>El medio TSI contiene una cantidad limitante de glucosa y una concentracin 10 veces mayor de lactosa. Las Enterobacterias y los fermentadores de glucosa comienzan metabolizando este azcar, ya que las enzimas que utilizan la glucosa estn presentes como constituyentes de las bacterias, y stas pueden obtener mayor energa por utilizacin del azcar ms simple.Todos los otros carbohidratos deben ser convertidos en glucosa para entrar en el ciclo de Embden-Meyerhof. La utilizacin de la glucosa se realiza en forma aerobia sobre la estra, donde el oxgeno presente acta como aceptor terminal de electrones y en la parte terminal de la columna en condiciones de anaerobiosis. Una vez que una bacteria fermentadora de glucosa ha reducido toda la glucosa disponible a piruvato, comenzar a metabolizar el piruvato a travs del ciclo aerbico de Krebs (sobre la estra), formando productos finales cidos. El cido en el medio hace virar el amarillo del indicador de pH, rojo de fenol. Entonces, luego de 6 horas de incubacin, la zona de la estra y el fondo del tubo inoculado con un fermentador de glucosa tendrn un color amarillo. Si el microorganismo no fermenta la glucosa, el fondo permanecer rojo (indicando que no hay variacin del pH) o se alcalinizar (lo que puede visualizarse por un color rojo algo ms intenso que del medio original), demostrando que la bacteria no es miembro de la familia Enterobacteriaceae.Despus de haber agotado la cantidad limitada de glucosa, una bacteria con capacidad para utilizar la lactosa o sacarosa comenzar a degradarlas. Como el medio contiene 10 veces ms lactosa que glucosa, las bacterias encontrarn sustrato suficiente para continuar la formacin de productos finales cidos. Luego 18 24 horas de incubacin todo el medio TSI permanecer de color amarillo. Esta reaccin se denomina cido sobre cido (A/A) y el organismo se identifica como un fermentador de lactosa. La produccin de gas provocar la ruptura de la columna de agar o la empujar hacia la parte superior, de modo que un fermentador de lactosa que produce gas dar una reaccin A/A ms gas.Interpretacin1. Rojo en pico de flauta: alcalino; degradacin aerbica de glucosa. Amarillo en capa profunda: cido; degradacin anaerbica de la glucosa.2. Amarillo en pico: cido Amarillo en capa profunda: cido3. Rojo en pico de flauta: alcalino Sin cambio de color en capa profunda: alcalina.4. Produccin de H2S: precipitado negro5. Produccin de gases: Produccin de burbujas, descomposicin del medio, ligera muesca del medio sobre el costado del tubo o desplazamiento del medio del fondo, dejando un espacio libre.Forma de reporte de resultados. 1.K / A (Fermentacin de glucosa solamente) 2.A / A (Fermentacin de glucosa y lactosa) 3.K / K (No fermentacin de glucosa y lactosa).Los resultados se escriben siempre siguiendo un patrn. Primero la reaccin del pico de flauta seguida por la reaccin de la capa profunda, separadas por una barra.</p> <p>isina Hierro Agar.</p> <p>Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilacin / desaminacin de la lisina y en la produccin de cido sulfhdrico.</p> <p>FundamentoEn el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada.Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del medio.</p> <p>Resultados</p> <p>1-Decarboxilacin de la lisina:</p> <p>-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.</p> <p>2-Desaminacin de la lisina:</p> <p>Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp.</p> <p>3-Produccin de cido sulfhdrico:</p> <p>-Prueba positiva: Ennegrecimiento del...</p>