Alterações cromossômicas

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    29-Jun-2015

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  • 1. 12/08/2013 1 ALTERAES CROMOSSMICAS Doutoranda Jemima Barros Departamento de Gentica CARITIPO HUMANO - Conjunto de cromossomos especfico da espcie humana: - Clulas humanas diploides (dois conjuntos cromossmicos) 46c nn 2n 46,XX 46,XY Metfase Caritipo Feminino: 46,XX CARITIPO HUMANO CARITIPO HUMANO Caritipo Masculino: 46,XY Metfase ALTERAES CROMOSSMICAS Alteraes cromossmicas Variaes no conjunto cromossmico de uma espcie. Alteraes no conjunto cromossmico Desbalano da informao gentica Alteraes fisiolgicas, metablicas, anatmicas e de funo ALTERAES CROMOSSMICAS Responsveis por uma srie de condies clnicas distrbios cromossmicos: - Perdas fetais (Abortos espontneos 42%) - Malformaes congnitas - Retardo mental - Distrbios do desenvolvimento sexual e infertilidade - Patogenia do cncer 1 em cada 160 nativivos 2% de todas as gestaes (mulheres > 35 anos)

2. 12/08/2013 2 ALTERAES CROMOSSMICAS INDICAO DO ESTUDO CROMOSSMICO Diagnstico clnico Malformao / retardo mental Atraso da puberdade Baixa estatura RDNPM Problemas reprodutivos Infertilidade Abortamento de repetio Diagnstico pr-natal Idade materna avanada Alterao cromossmica equilibrada Alterao ao ultrassom/exames laboratoriais OBTENO CROMOSSMICA TECIDO AMOSTRA Sangue Perifrico Puno venosa Lquido amnitico Aminiocentese Vilosidade Aspirao Sangue Fetal Cordocentese Produto de Aborto Curetagem Medula ssea Puno esternal/iliaca Tecidos slidos Biopsia ALTERAES CROMOSSMICAS CULTURA DE LINFCITOS sangue meio de cultura soro fetal bovino fito-hemaglutinina estufa 37o C 72 horas colchicina 2 horas Preparao cromossmica: hipotnica fixador Lminas: preparao colorao anlise Gianna Carvalheira Unifesp Rpido, fcil e baixo custo Permite a contagem do nmero de cromossomos Permite avaliar a qualidade dos preparados cromossmicos Colorao Convencional: - Incorporao de corante DNA-especfico (Giemsa) TCNICAS CITOGENTICAS Tcnicas de Bandeamento e Colorao Produzem bandas ou faixas ao longo dos cromossomos Diferenciao longitudinal dos cromossomos Identificao dos cromossomos Bandas G, R e Q Marcam regies especficas Bandas C, RON... ALTERAES CROMOSSMICAS TCNICAS CITOGENTICAS Tratamento cromossmico de desnaturao ou digesto enzimtica seguida da incorporao de corante DNA-especfico. ALTERAES CROMOSSMICAS BANDEAMENTO G - Desnaturao com Tripsina seguida de colorao com Giemsa Cada par cora-se em padro tpico de bandas claras e escuras 3. 12/08/2013 3 Ideograma mostrando padro de bandeamento G, com cerca de 400 bandas. ALTERAES CROMOSSMICAS BANDEAMENTO G Sistema Internacional para Nomenclatura em Citogentica Humana ISCN (1985; 1995) Padronizao internacional da nomenclatura So arrumados em pares (homlogos) Grupos A a G (Tamanho, posio do centrmero e padro de Bandas) 22 autossomos + 1 sexual = 46,XX e 46,XY p e q regies bandas sub-bandas NOMECLATURA C p q Ex: 2q32, 2p25, 1q42.1 ALTERAES CROMOSSMICAS BANDEAMENTO R Gianna Carvalheira Unifesp Banda Reversa - Bandeamento R: Cromossomos recebem pr-tratamento- Bandeamento R: Cromossomos recebem pr-tratamento com calor e colorao Giemsa. ALTERAES CROMOSSMICAS BANDAS G/ R 4 der(4) p16 BANDA G - Bandas Reversas bandas R claras e escuras so- Bandas Reversas bandas R claras e escuras so o inverso das observadas no bandeamento G. 4 der(4) p16 BANDA R ALTERAES CROMOSSMICAS BANDEAMENTO Q Borck et al.J Med Genet 38 (2001). -Bandeamento Q: Colorao feita com quinacrina-mostarda,-Bandeamento Q: Colorao feita com quinacrina-mostarda, observada em microscopia de fluorescncia. As bandas so brilhantes e opacas (bandas Q). As bandas Q brilhantes correspondem s bandas G escuras ricas em AT. ALTERAES CROMOSSMICAS BANDEAMENTO C -Bandeamento C: desnaturao com hidrxido de brio e-Bandeamento C: desnaturao com hidrxido de brio e colorao com Giemsa. Colorao da regio centromrica regies de heterocromatina constitutiva. 4. 12/08/2013 4 Cromossomos 13, 14, 15, 21 e 22 Regio rica em DNAr, que constitui o nuclolo ALTERAES CROMOSSMICAS BANDEAMENTO NOR (Nucleolar Organizer Regions) - RON Regio organizadora do nuclolo Colorao com o Nitrato de Prata ALTERAES CROMOSSMICAS TCNICAS CITOGENTICAS Esclarecer rearranjos complexos ou detectar rearranjos indetectveis anlise convencional, para confirmao ou diagnstico rpido. - Hibridizao in situ Fluorescente (FISH) - Hibridizao Genmica Comparativa (CGH) - Caritipo Espectral (SKY) - FISH-multicolor (M-FISH) - Multicolor Banding (MCB) Citogentica Molecular: Hibridizao in situ Fluorescente (FISH) TCNICAS CITOGENTICAS Verificar a presena da sequncia de interesse e qual a exata localizao elucidar anormalidades a nvel de gene segmento de DNA ou RNA (sonda) sequncia de nucleotdeos complementar (sequncia-alvo) + ALTERAES CROMOSSMICAS TCNICAS CITOGENTICAS Sonda WCP 4 Xpter e CEP 13 green 21 red M-FISH SKY MCB Alteraes Numricas Alterao no nmero total de cromossomos Alteraes Estruturais Alterao na estrutura dos cromossomos Euploidias Aneuploidias Balanceadas No Balanceadas ALTERAES CROMOSSMICAS Euploidias:Mltiplos exatos do conjunto haplide; Condies normais: n = 23 Conjunto haploide (gametas normais) 2n = 46 Conjunto diploide normal (clulas somticas) Condies Anormais: 3n = 69 Triploidia (69,XXX) 4n = 92 Tetraploidia (92,XXXX) ALTERAES CROMOSSMICAS NUMRICAS Poliploidia mais que dois conjuntos cromossmicosPoliploidia mais que dois conjuntos cromossmicos um evento raro, quase incompatvel com a vida! - Erros durante a diviso celular nos gametas, - Falha na concluso da diviso inicial do zigoto. 5. 12/08/2013 5 Triploidia - Quase sempre resulta em aborto espontneo. - A sobrevida at o nascimento rara. TRIPLOIDIA (3n) Aneuploidias: Ganho ou perda de um ou poucos cromossomos Principais Aneuploidias: 2n-1 = 45 Monossomias 2n+1 = 47 Trissomias Aneuploidias Raras: 2n+2 = 48 Tretrassomia 2n-2 = 44 Nulissomia (par) Trissomia dupla 2 cromossomos distintos 3 cpias - So decorrentes da no disjuno Mittica (Mosaicismo) Meitica ALTERAES CROMOSSMICAS NUMRICAS No disjuno Mittica Mosaicismo cromossmico Resultante da no disjuno mittica no incio do desenvolvimento embrionrio. Devido a existncia de duas ou mais linhagens celulares derivadas de um mesmo zigoto. ALTERAES CROMOSSMICAS NUMRICAS Presena de dois ou mais caritipos distintos em um indivduo ou tecidoPresena de dois ou mais caritipos distintos em um indivduo ou tecido EX: 47,XY,+21[20]/46,XY[80] 47,XX,+21[70]/46,XX[30] ALTERAES CROMOSSMICAS NUMRICAS ORIGEM DAS ANEUPLOIDIAS Gametas Anormais (100%) 24 24 22 22 Gametas Anormais (50%) No disjuno - Meitica 23 23 2323 23 24 2223 Gametas Normais (100%) n (n+1) (n-1) n (n+1) (n-1) 23 + = + = + = 23 2324 2322 Zigoto Zigoto Zigoto Fecundao ORIGEM DAS ANEUPLOIDIAS 23 + = + = + = 23 2324 2322 Zigoto 2n = 46 (diploide normal) Zigoto 2n + 1 = 47 (Trissomia) Zigoto 2n 1 = 45 (Monossomia) Fecundao ORIGEM DAS ANEUPLOIDIAS 6. 12/08/2013 6 ALTERAES CROMOSSMICAS NUMRICAS Aneuploidias SNDROME DE DOWN Distrbio cromossmico mais comum 1:800 nascimentos Descrita: Langdon Down, 1866 47,XX,+21 Ponte nasal baixa Boca aberta com lngua protusa Face achatada e Braquicefalia Mo curta com prega palmar nica Pescoo curto Prega epicntica 95% - trissomia livre 21, 5% - t(14;21), t(21;21) e 2% - mosaicismo Hipotonia HIPOTONIA MUSCULAR Constipao intestinal dificuldade de mastigao Dificuldade de saciedade Consumo de alimentos GANHO DE PESO Dificuldade executar atividades da criana Agravamento de problemas cardacos Educao nutricional SNDROME DE DOWN ALTERAES CROMOSSMICAS NUMRICAS Aneuploidias SNDROME DE EDWARDS Retardo mental / desenvolvimento 1:7500 nascimentos Grave malformao cardaca Orelhas malformadas Mos cerradas P de cadeira de balano Hipertonia 95% dos conceptos so abortados Sobrevida baixa 47,XX ou XY,+18; 47,XY,+18/46,XY 47,XY,+18 Occipcio proeminente e mandbula recuada ALTERAES CROMOSSMICAS NUMRICAS Aneuploidias SNDROME DE PATAU 1:15.000 a 1:25.000 nascimentos Retardo mental e do crescimento Graves Malformaes SNC Anormalidades oculares Lbio leporino e fenda palatina P de cadeira de balano Polidactilia e mos fechadas Defeitos cardacos e urogenitais 47,XX ou XY,+13; 46,XX ou XY,t(13;14) 47,XX,+13 ALTERAES CROMOSSMICAS NUMRICAS AneuploidiasSNDROME DE TURNER Inteligncia normal 1:4000 nascimentos Linfedema mos e ps dos bebs Baixa estatura Disgenesia gonadal Pescoo alado Retardo no desenvolvimento sexual / Infertilidade Anomalias renais e cardiovascular Trax largo e mamilos afastados 45,X; 46,X,r(X)/46,XX; 45,X/46,X,r(X)/46,XX; 45,X/46,X,del(Xp); 46,X,i(Xq) 45,X ALTERAES CROMOSSMICAS NUMRICAS Aneuploidias SNDROME DE KLINEFELTER Altos, magros com membros longos 1:1000 nascimentos Inteligncia reduzida, dificuldade de aprendizado, problemas sociais e de adaptao psicossocial Testculos pequenos Ginecomastia Quase sempre infrteis Caractersticas sexuais secundrias no se desenvolvem 47,XXY; 48,XXXY; 49,XXXXY 47,XXY 7. 12/08/2013 7 ALTERAES CROMOSSMICAS NUMRICAS Aneuploidias SNDROME DO DUPLO Y No possui fentipo anormal 1:1000 nascimentos Homens altos Desenvolvimento sexual e inteligncia normal Fertilidade geralmente normal Risco aumentado para problemas educacionais e comportamentais 47,XYY 47,XYY ALTERAES CROMOSSMICAS NUMRICAS AneuploidiasTRIPLO X / TRISSOMIA DO X No possui fentipo anormal 1:1000 nascimentos Fertilidade em geral normal* Estatura acima da mdia 70%: dificuldade de aprendizagem (Dficit de QI)* Hiperatividade e tendncia esquizofrenia 47,XXX; 48,XXXX; 49,XXXXX 47,XXX Comportamento anormal Alteraes Numricas Alterao no nmero total de cromossomos Alteraes Estruturais Alterao na estrutura dos cromossomos Euploidias Aneuploidias Balanceadas No Balanceadas ALTERAES CROMOSSMICAS ALTERAES CROMOSSMICAS ALTERAES CROMOSSMICAS ESTRUTURAIS Modificaes na estrutura dos cromossomosModificaes na estrutura dos cromossomos Alteraes Estruturais Balanceadas No Balanceadas Induzidas: Agentes fsicos, qumicos ou biolgicos Quebras cromossmicas reconstituio em configurao anormal rearranjos estruturais Espontneas Alteraes Balanceadas: Complemento normal de informaes genticas, sem consequnci

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