Coloration de gram

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    21-May-2015

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  • 1. COLORATION DE GRAM & OBSERVATION AU MICROSCOPEBoughammoura Ada

2. COLORATION DE GRAM1. REALISATION DUN FROTTIS2. COLORATION DE GRAM3. OBSERVATION AU MICROSCOPE 3. REALISATION DUN FROTTIS- nettoyer une lame de verre lthanol / actone- dposer sur une lame propre une goutte de suspensionbactrienne- raliser le frottis partir du centre de la lame endcrivant un mouvement circulaire- scher le frottis en passant la lame la flamme du becbunsen (2 3 fois)- fixer la prparation en flambant la lame avec lthanol /actone- scher la lame la flamme 4. COLORATION DE GRAM- Coloration dveloppe en 1884 par un mdecin danoisChristian Gram- mthode de coloration la plus largement utilise enbactriologie- mise en vidence de diffrences de nature de la paroibactrienne (bactries Gram ngatif ont un peptidoglycaneplus fin que celles Gram positif)- se droule en 3 temps:1. coloration au violet de gentiane et fixation de la colorationpar le lugol2. traitement lthanol (dissolvant le violet de gentianedcolorant les bactries Gram ngatif)3. contre-coloration la fushine ou safranine (colorant en roseles bactries prcdemment dcolores) 5. COMPOSITION DE LA PAROI BACTERIENNEGram +Gram-Peptidoglycane pais Peptidoglycane fin90% de la paroi10% de la paroiLthanol traverse uniquement la paroi des bactries Gramngatif (dissolution des lipides de la membrane externe) etdcolore le cytoplasme! 6. COLORATION DE GRAM:PROTOCOLE- verser quelques gouttes de violet de gentiane sur lefrottis- attendre 1 minute- liminer lexcs de violet de gentiane puis avec un peudeau sans insister- plonger la lame 1 minute dans le lugol- rincer abondamment leau- rincer lthanol / actone des 2 cts de la lame- rincer abondamment leau- plonger la lame 1 minute dans la fushnine ou safranine- rincer abondamment leau- scher la lame la flamme 7. COLORATION DE GRAM: RESULTATS- les bactries Gram positif apparaissent violettes- les bactries Gram ngatif apparaissent roses- les vieilles cultures bactriennes peuvent donner desrsultats de Gram variables en raison de la dgradation dela paroi cellulaire 8. OBSERVATION AU MICROSCOPE- grossissement x100 immersion dans lhuile de paraffine - ouverture maximale du diaphragme