Contaje de placa aeróbica, Tinción Gram y Aislamiento

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Contaje de placa aerbica, Tincin Gram y Aislamiento. Laboratorio de Microbiologa de Alimentos. Contaje de placa aerbica. Provee un estimado general de bacterias aerbicas vivas Evala calidad Predictor de shelf-life Monitoreo ambiental Excluye Anaerobos obligados Microaeroflicos. - PowerPoint PPT Presentation

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  • Contaje de placa aerbica, Tincin Gram y AislamientoLaboratorio de Microbiologa de Alimentos

  • Contaje de placa aerbicaProvee un estimado general de bacterias aerbicas vivasEvala calidadPredictor de shelf-lifeMonitoreo ambientalExcluyeAnaerobos obligadosMicroaeroflicos

  • Contaje en placasAsumeCada colonia proviene de una sola clula bacterialAlgunas colonias puede ser originadas de una agrupamientode bacterias Se reporta como- Unidad formadora de colonias (CFU)/gramo ml.- NO como bacterias totales

  • Resultados del Contaje de placa aerbicaEvala la sanitacin de una productoPredice la durabilidad (Shelf-life)Indicador de seguridad (Safety)Monitorea el ambiente

  • Limitaciones del contaje de placa aerbicaSlo se consideran organismos aerbicosNo se sabe el tipo de bacteriaEl medio de cultivo permite el crecimiento de ciertas bacteriasLimitaciones visuales/Errores humanosDifcil de distinguir entre partculas de alimentos y bacteriasNo se debe utilizar en alimentos fermentadosLas colonias podran ser muy pequenas para verse

  • Tipos de muestraLquidasLquidos no viscosos se miden con pipetasLquidos viscosos se pesanSlidasPesar aspticamenteHisopoTomar muestra pasando un hisopo por un rea definidaAmbientales y de envasesEnjuage el interior del envaseAbra una placa para tomar una muestra del airePlacas RODAC

  • Protocolo para Contaje en PlacasPrepare un homogenado de la muestraDilucin 1:101 parte de la muestra a 10 partes del volumen totalMezcle en licuadora o stomacherpor 2 minutos10 g/ml muestra90 ml of diluyente1:10 Dilucin 10-1

  • Protocolo para contaje en placasPrepare diluciones seriadasDiluya hasta que obtenga colonias separadas entre 20-200 en una placaUtilice una pipeta estril entre cada dilucinPonga la pipeta usada en el rea designadaMezcle cada botella de dilucin 25 veces en un arco de 90 grados por 7 segundosUse amortiguador de fosfato o peptona para diluir

  • DilucionesDilution Blanks Containing 90 ml Diluent10 ml10 ml10 ml10 ml10-110-210-310-410-5(1:10)(1:100)(1:1000)(1:10000)(1:100000)Sample Homogenate

  • Placas10-110-210-310-410-51 ml1 ml1 ml1 ml1 ml1 ml1 ml1 ml1 ml1 mlPut 1 ml of Each Dilution into Empty Petri-Dish

  • Protocolo Contaje de placasAnada 18-20 ml de agar (45-50F), a la placa petriEl agar no puede estar muy caliente porque mata las bacteriasMtodo estndar agar de placa (Plate Count Agar)Mueve 10x en cada direccinDeje que solidifiqueIncube las placas invertidas a 35-37 por 48 horas.

  • EsterilizacinEl equipo y el medio de cultivo debe estar estrilEsterilizacin en aire caliente170 C por una horaPonga en horno por 2 horas luego que ste alcance la temperaturaEnvuelva en papel o papel de aluminio Esterilizacin por vapor121C por 15 min. Debe alcanzar el autoclave 15 psi de presinEquipo y medio lquidoNo ponga las tapas apretadas

  • Tincin GramGram positivo negativoBasado en la estructura de la paredGram positivoPared gruesa por la capa de peptidoglicanoGram negativoCapa fina con presencia del lipopolisacrido

  • Obtencin de colonias aisladasLa meta es obtener colonias aisladas del alimentos y/o cultivoLas colonias pueden ser identificadas y evaluadas1234Collect loopful of cultureStreak in each area starting with area 1Flame Loop in between areas

  • Contaje de placasSlo cuente las placas que tengan entre 20 y 200 coloniasMs de 200TNTCMenos de 20TFTC

  • Contaje de placas1 Too Numerous to Count2 Too Few to CountAverage two countable plates and Multiply by Dilution FactorCount is 175 x 104 Must Convert to TWO Significant Digits1.8 x 106 cfu/ml or g

  • Contaje-EjemplosUse ALL FOUR even though 300 is outside range. If ONE PLATE is in RANGE, use BOTH for Average.250 x 102 2.5 x 104125 x 103 1.3 x 105AVERAGE 7.8 x 104 cfu/g or ml

  • Contaje - EjemplosAll Dilutions are outside Range so we MUST use counts Outside range350 x 104 3.5 x 106 cfu/ml or g*Use an * when using dilutions outside countable rangesThis means it is an ESTIMATED count

  • Contaje- EjemplosIf Both Dilutions are outside Range, use the Higher Dilution(LOWER COUNTS)7.5 x 103 cfu/ml or g*

  • Placas con muchas coloniasCuente la dilucin mayor y utilice las rejillas en el contador de colonias1 rejilla = 1 cm2Una placa plstica estndar tiene 56 cm2 de rea de superficieSi 10 colonias/ cm2 Cuente 4 cuadrados, promedie y multiplique por 56

  • Variaciones al contaje arobicoPsicotrficosIncube a 5-7 C por 10 dasUse esparcidoTermodricosPonga 5 ml de la muestra o la dilucin 1:10 de la muestra slida en bano de agua entre 60-80n C por 30 minutosEnfre en hielo por 10 minutosPonga en placa e incube

  • Primer Perodo

  • Esquema

  • Segundo Perodo

  • Petrifilms

  • Ventajas y desventajas de utilizar los petrifilmsVentajasRpidoMenos espacioFcilesNo hay que preparar medioDistincin entre CFU vs. Partculas de alimentos DesventajasMorfologa de la coloniaCostosoDifcil de leer