Estudo da distribuição da frequência de genótipos de ... ?· Estudo da distribuição da frequência…

  • Published on
    11-Dec-2018

  • View
    214

  • Download
    0

Embed Size (px)

Transcript

<p>UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEAR UFC </p> <p>DEPARTAMENTO DE PATOLOGIA E MEDICINA LEGAL </p> <p>PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM MICROBIOLOGIA MDICA </p> <p>Estudo da distribuio da frequncia de gentipos de Helicobacter pylori em leses gstricas </p> <p>ANA PAULA SANTOS DO CARMO </p> <p>Fortaleza-CE 2011 </p> <p>ANA PAULA SANTOS DO CARMO </p> <p>Estudo da distribuio da frequncia de gentipos de Helicobacter pylori em leses gstricas </p> <p>Orientadora: Professora Dra. Slvia Helena Barem Rabenhorst </p> <p>Fortaleza-CE 2011 </p> <p>Dissertao apresentada ao Programa de Ps Graduao em Microbiologia Mdica do Departamento de Patologia e Medicina Legal da Universidade Federal do Cear como pr requisito para obteno do ttulo de Mestre em Microbiologia Mdica </p> <p>Dados Internacionais de Catalogao na Publicao Universidade Federal do Cear Biblioteca de Cincias da Sade </p> <p> C285i Carmo, Ana Paula Santos do </p> <p> Estudo da distribuio da frequncia de gentipos de Helicobacter pylori em leses gstricas/ Ana Paula Santos do Carmo. 2011. 109 f. : il. Dissertao (Mestrado) Universidade Federal do Cear, Faculdade de Medicina, Programa de Ps-Graduao em Microbiologia Mdica, Fortaleza, 2011. </p> <p> Orientao: Prof Dr Slvia Helena Barem Rabenhorst </p> <p>1. Helicobacter pylori. I. Ttulo. Gastrite, Gastrite atrfica, lcera. </p> <p> CDD 616.33 </p> <p>______________________________________________________ </p> <p>ANA PAULA SANTOS DO CARMO </p> <p>Estudo da distribuio da frequncia de gentipos de Helicobacter pylori em leses gstricas </p> <p>Banca Examinadora </p> <p>___________________________________________________________ </p> <p>Prof Dr Slvia Helena Barem Rabenhorst (Orientadora) Universidade Federal do Cear UFC </p> <p>_____________________________________________________________ Prof Dr Maria Ins de Campos Moura Pardini </p> <p>Universidade estadual Paulista - Unesp </p> <p>______________________________________________________________ Prof Dr Ricardo Aires Correia </p> <p>Universidade Federal do Cear UFC </p> <p>_________________________________________________________________ Prof Dr Jos Telmo Valena Jnior </p> <p>Universidade Federal do Cear UFC </p> <p> minha filha, meus pais e minha famlia, que sempre me </p> <p>apoiaram, incentivaram e entenderam todas as minhas </p> <p>ausncias. </p> <p>Agradecimentos </p> <p>A Deus pelo sublime dom da vida, minha fora, minha luz, meu guia e meu caminho. </p> <p>Aos meus pais, Antnio Paixo e Maria Socorro, por todo apoio, incentivo e amor incondicional. </p> <p> minha filha Ana Beatriz, pela sua doura, compreenso e cooperao, minha companheirinha. Te amo demais. </p> <p>A toda a minha famlia, especialmente, aos que participaram direta ou indiretamente da realizao deste projeto na minha vida. </p> <p>A Maria Juraci Gois da Silva, por seu profissionalismo, apoio e amizade, sua ajuda foi fundamental. </p> <p>Ao programa de Ps Graduao em Microbiologia Mdica representado pelos professores e demais funcionrios pelo empenho na formao cientfica dos ps-graduandos. </p> <p>A CAPES pelo suporte financeiro. </p> <p>Aos pacientes includos neste estudo e seus familiares, pela ateno concedida. </p> <p> professora Dra. Silvia Helena Barem Rabenhorst, pelos ensinamentos, orientao, dedicao e pacincia. Sua ajuda foi fundamental para a minha formao como mestre e a realizao deste trabalho. </p> <p> Prof.. Fernanda Capelo, ao Dr. Dalgimar Bezerra de Menezes e a Dr Rgia Maria Vidal Patrocnio por sempre nos receberem com ateno. </p> <p>Ao laboratrio BIOPSE em nome do Dr Dalgimar Bezerra de Menezes e Da Dra Rgia Maria Vidal Patrocnio pela prontido no fornecimento dos laudos histopatolgicos; </p> <p>Ao Hospital Universitrio Walter Cantdeo, Hospital So Jos de Doenas infecciosas e ao Hospital Geral de Fortaleza por nos permitir o acesso para a execuo deste estudo; </p> <p>Aos participantes da banca, por aceitar o convite para participar da avaliao deste trabalho e pelas valiosas contribuies; </p> <p> equipe de mdicos, enfermeiros e auxiliares do servio de endoscopia dos hospitais: Hospital Universitrio Walter Cantdeo, Hospital So Jos de Doenas infecciosas e Hospital Geral de Fortaleza, pela contribuio </p> <p>no desenvolvimento desse estudo; </p> <p>A doutoranda Rita de Cssia Barbosa, por seu carinho e doura, sua presena sempre nos alegra. </p> <p> doutoranda Valeska Portela Lima, pelo apoio de todos os momentos, ensinamentos, presteza, incentivo e por acreditar em mim. Voc um exemplo de pessoa e de profissional. </p> <p> doutoranda Marknia Klia Santos Alves, por sua amizade, suas palavras de incentivo e por estar sempre pronta a ajudar. </p> <p> doutoranda Isabelle Joyce de Lima Silva Fernandes, por seu sorriso contagiante, alegria, apoio e palavras de incentivo. Admiro muito sua disciplina e competncia, </p> <p> mestranda Debora Menezes Costa, por sua doura, sempre estar disponvel a ajudar e por seu profissionalismo. </p> <p> mestranda Francivandi Coelho Barbosa, minha parceira de projeto, por seu apoio e pelo seu comprometimento com a pesquisa; </p> <p> Aos alunos de iniciao cientfica Pedro, Igor e Ana Paula companheiros neste projeto, pela cooperao </p> <p>dedicao e presteza. </p> <p>Aos amigos do Laboratrio de Gentica Molecular-LABGEM, Denise, Patrcia, Eduardo, Carol, </p> <p>rika, Marcio Vincius, Smia, Ingrid, Rogrio, Lia e Paulo Roberto pela to agradvel convivncia e </p> <p>ensinamentos compartilhados, que tornaro este trabalho menos rduo. </p> <p>A todas as pessoas que torceram por mim e que contriburam de forma direta ou indireta para a realizao deste trabalho. </p> <p>"Conhecer no demonstrar nem explicar, acender a viso." </p> <p>Antoine de Saint-Exupry </p> <p> preciso amar as pessoas como se no houvesse amanh... </p> <p>Renato Russo </p> <p>RESUMO </p> <p>A bactria Helicobacter pylori, um agente etiolgico bem estabelecido para o desenvolvimento de leses gstricas como gastrite, lcera pptica, metaplasia e doenas malignas, com alta incidncia de infeco em todo mundo, porm cerca de 80% dos indivduos infectados permanecem assintomticos e apenas uma minoria desenvolve doenas a ela relacionadas. Estudos tm sido realizados na tentativa de identificar a relao de genes determinantes da patogenicidade de H. pylori, entretanto, at o momento apenas os genes cagA e o alelo de vacA s1m1 so considerados marcadores de virulncia para o desenvolvimento de leses gstricas mais graves. A bactria H. pylori possui uma alta variabilidade gentica, sendo que um dos mecanismos propostos para o desenvolvimento de leso seria atravs da inflamao. Diferenas na intensidade de respostas inflamatrias poderiam ser decorrentes do perfil genotpico da cepa infectante. Recentes trabalhos apontam a importncia dos genes cagE, virB11 de H. pylori, em cncer gstrico. Entretanto, estudos em leses gstricas so restritos. Assim, o objetivo deste trabalho foi determinar o perfil genotpico das cepas de H. pylori quanto a presena dos genes de virulncia cagA, cagE, virB11, vacA e flaA, circulantes no estado do Cear em 201 casos de leses gstricas de diferentes gravidades, coletadas de pacientes disppticos atendidos em trs hospitais de Fortaleza-CE. A deteco de H. pylori foi feita atravs da amplificao do gene ureC, os genes estudados por amplificao de fragmentos especficos, usando a tcnica de PCR, foram observados em gel de agarose 1% e poliacrilamida a 6% e 8%. Neste estudo houve um predomnio do sexo feminino 59% (119/201), principalmente na faixa etria (15-44) 30% (61/201), alta taxa de infeco por H. pylori 97,5% (196/201). A gastrite crnica ativa (GCA) foi a leso gstrica mais frequente (55,7%;112/201), associada a pacientes na faixa etria de 15-44 (36,6% : 41/112) opondo-se metaplasia intestinal em que, a frequncia dos casos aumentou com a idade sendo maior em pacientes mais velhos 46% (16/35), o que concorda com a literatura. O nico caso de displasia ocorreu numa paciente &gt; 65 anos. As leses gstricas foram predominantemente localizadas no antro. O gene cagA foi mais frequente na gastrite crnica ativa (GCA), estando tambm em alta frequncia na gastrite atrfica (GA) e metaplasia intestinal (MI). Na GCA foi observado tambm alta frequncia dos genes cagE, virB11, vacAm1 e flaA, com diferena estatstica, quando comparada com a gastrite crnica inativa (GCI) (cagA - p=0,007 cagE- p=0,000, virB11 - p=0,005, vacAm1- p=0,047 e flaA - p=0,001), sendo que os genes virB11 e flaA foram mais frequentes na GCA do que na lcera. Os alelos s1 e m1 de vacA , bem como a combinao s1m1 foram os mais frequentes nas leses gstricas. Os casos H. pylori positivos foram agrupados de acordo com a presena dos genes estudados, levando em considerao a presena do alelo s1 e os genes da ilha. Nessas anlises foi observada maior frequncia de cepas contendo os genes vacA s1 e [Ia (cagA+, cagE+ e virB11+ ) + Ib (cagA+ e virB11+; cagE+ e virB11+) ; 47,7% ] na gastrite crnica ativa em relao a gastrite crnica inativa (GCI), esta com maior frequncia de cepas dos grupos [Ic (cagA+ ou cagE+ ou virB11+ ou cagA+ e cagE+) +Id (ureC+); 62%]. Adicionalmente, maior frequncia de cepas pertencentes aos grupos Ia e Ib foi observada na metaplasia intestinal incompleta, (59%), enquanto que na metaplasia intestinal completa uma maior frequencia de cepas pertencentes aos grupos Ic + Id, (78%) (p=0,027). Todos os casos de gastrite atrfica e lcera eram do grupo I, e um nico caso de displasia pertencia ao grupo Ia. Esses dados evidenciam uma associao de cepas com gentipos mais virulentos em leses com potencialidade de malignizao. Palavras-chave: Helicobacter pylori; leses gstricas, gene cagA, gene cagE, gene virB11, gene flaA, gene vacA. </p> <p>ABSTRACT The bacterium Helicobacter pylori is a well-established etiological factor in the development of gastric lesions such as gastritis, peptic ulcers, metaplasia and malignancy. The incidence of infection by this pathogen is high worldwide, but about 80% of infected individuals remain asymptomatic, and only a minority develops related diseases. Many studies have been conducted in an attempt to identify the involvement of genes in determining the pathogenicity of H. pylori, but so far, only the genes cagA and vacA allele s1m1 are considered virulence markers for the development of the more severe gastric lesions. H. pylori bacteria have a high genetic variability and one of the proposed mechanisms for lesion development is through inflammation. Differences in the intensity of inflammatory responses could be due to the genotypic profile of the infecting strain. Recent studies indicate the importance of the genes cagE and virB11, but mostly involving gastric cancer, while their role in gastric lesions is limited. The objective of this study was to determine the genetic subtypes of H. pylori strains and the presence of the virulence genes cagA, cagE, virB11 and flaA genes and vacA alleles, circulating in Ceara state, Brazil. Samples were collected from 201 cases of gastric lesions of varying severity, in dyspeptic patients treated at three hospitals in Fortaleza, Ceara State. The detection of H. pylori was performed using ureC gene amplification by PCR, and the detection of the genes studied was carried out by amplification of gene-specific fragments separated in 1% agarose gels. The sample was predominantly female (59%, 119/201) and mainly in the age group 15-44 years old (30%, 61/201), and had a high rate of H. pylori infection (97.5%, 196/201). Active chronic gastritis (ACG) was the most common gastric lesion (55.7%, 112/201), associated with patients aged 15-44 (36.6%, 41/112), unlike intestinal metaplasia, in which the frequency of cases increased with age, being higher in older patients (46%, 16/35), which agrees with the literature. A single case of dysplasia occurred in a patient &gt; 65 years. The lesions were predominantly located in the gastric antrum and 30% of the cases had lesions located in the body and antrum simultaneously. The cagA gene was more frequent in ACG, showing a statistically significant correlation (r = 0.220, p = 0.007); it also showed a high frequency in atrophic gastritis and in intestinal metaplasia. In ACG, a high frequency of the genes cagE, virB11, flaA and vacAm1 was also statistically associated when compared to chronic inactive gastritis (ICG) (cagA - p = 0.007, cagE - p = 0.000, virB11 - p = 0.005, vacAm1 p = 0.047 and flaA - p = 0.001), and the genes virB11 and flaA were more frequent in ACG than in ulcer. The vacA alleles s1 and m1, and the combination s1m1, were the most frequent ones in gastric lesions. Considering the genotypes of H. pylori grouped by the presence of the genes studied, we observed a higher frequency of the most virulent strains in the ACG group (Ia + Ib, 47.7%) when compared to ICG, the latter showing a higher frequency of less virulent strains (Ic + Id, 62%). Additionally, a higher frequency of more virulent strains, belonging to groups Ia and Ib, was observed in incomplete intestinal metaplasia (59%), while in complete intestinal metaplasia an increased frequency of less virulent strains, belonging to the groups Ic + Id (78%) (p = 0.027), was found. All cases of atrophic gastritis and ulcer were in group I, and the single case of dysplasia belonged to group Ia (high virulence). These data indicate the important role of more virulent strains in potential malignant lesions. </p> <p> Key-words: Helicobcter pylori, gastric lesions, cagA gene, cagE gene, virB11 gene, flaA gene, vacA gene. </p> <p>ndice </p> <p>1 INTRODUO .............................................................................................. .....................................7 </p> <p>1.1 HELICOBACTER PYLORI .................................................................................................. 7 1.2 MTODOS DE DIAGNSTICO DA INFECO POR HELICOBACTER PYLORI ........................... 8 1.3 LESES GSTRICAS ASSOCIADAS HELICOBACTER PYLORI ............................................. 10 1.3.1 Gastrite crnica ................................................................................................................ 11 1.3.2 Gastrite atrfica ................................................................................................................ 15 1.3.3 Metaplasia intestinal ........................................................................................................ 16 1.3.4 Displasia............................................................................................................................ 18 1.3.5 lcera pptica - gstrica e duodenal ................................................................................ 21 1.4 VARIABILIDADE GENTICA X VIRULNCIA DA CEPA ......................................................... 23 1.5 A COLONIZAO POR HELICOBACTER PYLORI ............................................................... 23 1.6 GENES DE VIRULNCIA ................................................................................</p>