Presntasi Complete

  • Published on
    18-Oct-2015

  • View
    4

  • Download
    0

Embed Size (px)

Transcript

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    1/25

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    2/25

    1 Andy Octavian

    2 Prasetyo Bayu Aji

    3 Musdalifah Noor

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    3/25

    APA ITU Preparat

    Sebelum dilakukan pemeriksaanmikroba secara mikroskopis maka

    mikroba tersebut harus dipersiapkanterlebih dahulu, agar pemeriksaannyadapat dilihat dengan jelas. Mikrobayang telah dipersiapkan in disebut

    Preparat.

    ?????

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    4/25

    SECARATIDAK

    LANGSUNG

    PEMBUATANPREPARAT

    SECARALANGSUNG

    METODEBASAH

    METODEBALOK

    GANTUNG

    METODE

    TETESANGANTUNG

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    5/25

    Merupakan metode yang dilakukan untuk mikrobayang tidak tahan terhadap pengeringan (fiksasi) dan

    pengecatan (pewarnaan).

    Dengan catatan mikroba yang digunakan masih hidup

    sehinngga dapat diamati kelakuan dari mikroba,

    misalnya gerakannya, pembelahan sel

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    6/25

    1. Metode basah Dengan cara mikroba disuspensikan dalam

    cairan kemudian ditetesi di atas kaca obyek

    dan ditutup dengan gelas penutup

    2. Metode Tetesan Gantung

    Awalnya suspensi bakteri ditemukan di atas

    kaca penutup. Yang kemudian ditutup denagn

    kaca yang telah dibuat khusus, selanjutnya dibalik dan siap diperiksa di mikroskop

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    7/25

    mula-mula disiapkan agar-agaryang dituangkan dalam petridish

    ditunggu sampai dingin,

    3. Metode Balok Gantung

    agar-agar tersebut dipotong-potong dengan ukuran 6mm2kemudian dipindahkandi atasgelas objek yang steril. agar-agar tersebut dipotong-potongdengan ukuran 6mm2 kemudiandipindahkandi atas gelas objekyang steril.

    Mikroba yang diperiksa ditaburkan diatas gelas objek yang sudah adaagar-agarnya, kemudian ditutupdengan gelas penutp yang steril.

    Diinkubasikan selama beberapamenit kemudian dipindahkan darigelas ke kaca berlubang.

    Kemudian ditutup denganparafin dan siap diperiksa dibawah mikroskop.

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    8/25

    Definisi

    pembuatan preparat dengan teknik ini

    sering disebut dengan pengecatan ataupewarnaan ayng digunakan untukpemeriksaan sifat morfologi mikroba.

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    9/25

    Pembuatan lapisna film dan fiksasi1. dengan jarum steril, suspensi mikrobadioleskan di atas kaca obyek hinggamembentuk lapisan film. Kemudiandilakukan fiksasi dengan membakardengan spritus alapisan film tadi beberapakali. Atau dapat juga dilakukan dengan

    menambahkan zat kimia seperti campuranasam cuka dan pikrat.

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    10/25

    Cat Biologis

    Cat dibagi menjadi 2 yakni :

    1. Cat basis

    Garam-garam cat yang ion-ion catnya adalah

    kation, contoh : Methylene blue, safranin,netral reddan anionnya adalah Cl, SO, asetat dll

    2. Cat Asam

    cat yang ion catnya adalh anion-anion dan kation-

    kationnya Na, K,Ca, dan NH contoh : eosinat,eosin, congo red, dll

    3. Cat-cat lain, seperti : Cat yang bersifat netral danindiferan, misalnya Sudan III dan eosin

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    11/25

    Film mikroba yang telah difiksasi kemudian

    direndam dalam larutan zat warna dalam waktu

    tertentu setelah itu dicuci dengan air mengalir yang

    bersih dan dikeringkan.Lama perendaman dalam zattergantung dari jenis mikroba yang diwarnai.Cat

    banyak digunakan adalah methylen blue,gentian

    violet,basic fuchsin atausafranin.

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    12/25

    Ada 2 macam pewarna diferensial yaitu :pewarnaan gram,dan pewarnaan asam secara cepat(acid fast).2.3.2 Pewarnaan Gram

    Pengecatan gram meliputi 4 tingkatan yaitu;1.Pemberian cat utama (larutan cat kristal violet)2.Pengintesifan cat utama dengan menambahkanlarutan IKI(mordan)

    3.Pencucian (dekolorisasi)denggan larutan alkohol4.Pemberian cat penutup (cat lawan )dalam hal inidigunakan safranin yang berwarna merah.

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    13/25

    Pengecatan gram dibedakan menjadi Bakteri gram

    positif dan negatif.

    - Bakteri gram positif ialah bakteri yang mengikat

    cat utama dengan kuat sehingga tidak dapat

    dilunturkan oleh peluntur dan tidak dapat diwarnai

    oleh cat lawan safranin yang berwarna ungu.- Bakteri gram negatif ialah bakteri yang daya

    mengikat cat utama tidak kuat sehingga dapat di

    lunturkan oleh peluntur dan dapat mengika cat lawan

    berwarna merah.

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    14/25

    Faktor-faktor yang mempengaruhi hasil pengecatan

    1. FiksasiCara fiksasi yang paling banyak yang di gunakan

    dalam pengecatan bakteri dengan membuat lapisan

    suspensi bakteri diatas gelas benda kemudian

    dikeringkan dengan cara dilewatkan beberapa kalidiatas nyala lampu spirtus,atau dengan menggunakan

    reagensi kimia.

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    15/25

    2. Substrat

    Berdasarkan macam cat yang diserap oleh sel ,

    ada tiga tipe sel yaitu :

    1. Sel-sel yang Basofil , yaitu sel-sel yang dapet

    mengikat cat biasa.2. Sel-sel Asidofil atau oksifil, yaitu sel yang dapat

    mengikat cat asam .

    3. Sel-sel yang Sudanofil, yaitu sel-sel yang dapat

    mengikat cat yang dapat larut dalam minyak.

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    16/25

    3. Peluntur cat (decolorizer)

    Macam-macam peluntur cat , misalnya:1. Peluntur cat yang lemah yaitu alkohol,air, minyak

    cengkeh ,aseton dan gliserin.

    2. Peluntur cat asam yaitu HCl , H2SO4,HNO3,dan

    campuran asam-asam dengan alkohol3. Peluntur cat basis yaitu KOH , NaOH, sabun dan

    garam basa

    4. Garam- gaaram logam berat yaitu AgNO3

    , MgSO4

    .

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    17/25

    4. Intentifikasi Pengecatan

    Mordan adalah suatu zat kimia yang dapatmenyebabkan sel bakteri dan dicat lebih intensif atau

    menyebabkan cat terikat lebih kuat pada jaringan sel

    bila dibandingkan dengan cara pengecatan tanpa

    diberi mordan,Ada beberapa macam mordan :

    1.Mordan basa yaitu mordan yang bereaksi dengan

    anion asam yang berwarna,misalnya alum,FeSO,

    kalium antimonium tartrat,asetol piridinium khlorida.2.Mordan Asam yaitu mordanyang bereaksi dengan

    cat-cat basa,misalnya asam tanin,asam pikrat,JKJ.

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    18/25

    5. Cat Penutup (cat lawan)

    Sebagai cat penutup yang banyak digunakan ialah

    methylene blue,safranin,erythrosin dan lain-lain

    tergantung macam pengecatannya.

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    19/25

    Beberapa Cara Pengecatan

    1. Pengecatan NegatifPengecatan ini merupakan pengecatan tidak

    langsung,karena yang dicat adalah latar belakangnya

    ,sedangkan bakteri tidak mengalami pengecatan. Cat yang

    banyak digunakan dalam pengecatan negatif ialah

    nigrosin dan tinta cina.

    2. Pengecatan Sederhana

    Pengecatan dilakukan menggunakan satu macam cat saja,

    sebelum mengecat dilakukan fiksasi dahulu. Pengecatanini dipakai untuk melihat bentuk bakteri, cat yang sering

    digunakan methylen blue, gentian fuchsin, basic fuchsin

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    20/25

    3. Pengecatan Gram

    pengecatan gram meliputi 4 tingkatan :

    1. Pemberian cat utama (lar.kristal violet)

    2. Pengintensifan cat utama dg menambahkan lar.

    Mordan (JKJ)

    3. Pencucian (gekolorisasi) dengan alkhohol

    4. Pemberian cat penutup (cat lawan) larutan safranin yg

    berwarna merah

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    21/25

    Faktor-faktor yang dapat menyebabkan variasi

    dalam pengecatan gram :1. Perubahan keasaman

    pH turun :bakteri gram positifbakteri gram negatif

    pH naik :bakteri gram negatif

    bakteri gram positif

    2. Penyimpangan cara pengecatan

    pencucian yang terlalu lama menggunakanalkhohol dapat menyebabkan bakteri gram positifmemberikan hasil seperti gram positif

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    22/25

    3. Faktor mediumbakteri gram positif yg lemah apabila terlalulama ditumbuhkan dalam medium yg mudah difermentasi dapat berubah menjadi gram negatif.

    4. Umur bakteribakteri gram positif yang telah menjadi tua ataukurang nutrisi makanan dapat berubah menjadibakteri gram negatif

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    23/25

    5. Perlakuan khusus

    bakteri gram positif yg bagian selnya dihilangkandapat larut dalam air panas, eter, atau larutanribonuklease dpt menjadi bakteri gram negatif.

    bakteri gram negatif yang dilarutkan dalam lar.Pekat DNA dpt berubah menjadi bakteri grampositif. Cont: E.Choli

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    24/25

    4. Pengecatan Acid fast (pengecatan ziehl nelsen)

    pengecatan acid fast termasuk pengecatandifferensial karena dapat membedakan bakteri yg acidfast (tahan terhadap pencucian asam) dan non acidfast (tidak tahan terhadap pencucian asam).

    misalnya bakteri yg bergenus Mycobacterium(M.tubercolosis, M.leprae) dan beberapaaktinomisetes apabila bakteri ini dicat dengancarbolfuchsin sambil dipanaskan 90C diataspenangas air selama 4 menit maka lapisan lilinya

    lunak dan cat menembus kedalam sel. Setelah dingincat akan terikat oleh sel. Sehingga tidak luntur dgpencucian alkohol maka bakteri tersebut bersifat acidfast.

  • 5/28/2018 Presntasi Complete

    25/25