Tincion Gram

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    11-Jun-2015

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Ins Gmez Padilla Laboratorio Multidisciplinario 3

TINCION GRAM

La tincin de Gram. Fue desarrollada empricamente por Christian Gramen 1884, a pesar del tiempo transcurrido la tincin apenas se ha modificado y es uno de los primeros pasos que se realiza para cualquier identificacin bacteriana.

La tcnica es capaz de diferenciar dos grandes grupos de eubacterias: Gram positivas y Gram negativas

Gram positivo

Gram negativo

La tincin de Gram. requiere cuatro soluciones: 1. Primer colorante un colorante bsico (+) que en contacto con las clulas cargadas negativamente, reacciona con ellas colorendolas. El mas utilizado es el cristal violeta. 2. Solucin mordiente. Fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las clulas. Los mordientes usados suelen ser sales metlicas, cidos o bases, como por ejemplo, una sol. diluida de yodo. 3. Agente decolorante: Es un disolvente orgnico; por ejemplo alcohol acetona (1:1). 4. Colorante de contraste. Es un colorante bsico de distinto color que el primer colorante, como por ejemplo, la Safranina.

Tincin de Gram

Cristal-violeta

Alcohol-acetona

Lugol

Safranina

El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas).

El lugol est formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI ( yoduro de potasio), el cual est presente para solubilizar el yodo. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta.

La mezcla de alcoholacetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram

Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen

PARED CELULAR DE LAS GRAM POSITIVAS capa de peptidoglicano es Lamucho ms gruesa Secretan exo-enzimas y realizan digestin extracelular Ac. Teicico y el peptidoglicano son factores pirognicos y Los polisacridos permiten la serotipificacin de cepas bacteriana

Gram

PARED CELULAR DE LAS GRAM NEGATIVAS La membrana citoplasmtica es igual a la de las Gram positivas Tienen una membrana externa adicional Importante barrera de permeabilidad En el espacio periplsmicose

almacenan enzimas Los Lipopolisacaridos (LPS) acta como endotoxinas

Los LPS constituyen los Antgenos O (Ag somtico)

Gram

Diferencias entre gram (+) y (-)

TINCION DE GRAMFROTIS FIJADO CON CALOR CUBRIRLO CON CRISTAL VIOLETA TODAS LAS CELULAS SE TIEN DE AZULVIOLETA CUBRIRLO CON LUGOL TODAS LAS CELULAS SE TIEN DE AZULNEGRO DECOLORAR CON ALCOHOL ACETONA GRAM-POSITIVAS RETIENEN EL COMPLEJO COLORANTE GRAM-NEGATIVAS SE DECOLORAN CUBRIRLO CON SAFRANINA- COLORANTE DE CONTRASTE GRAM-POSITIVAS LAS CELULAS APARECEN AZULVIOLETA GRAM-NEGATIVAS LAS CELULAS APARECEN ROJAS

Teora Stearn y Stearn1. Los microorganismos grampositivos pueden hacerse gramnegativos al aumentar la acidez. 2. Los microorganismos gramnegativos pueden hacerse grampositivos al aumentar la alcalinidad. 3. Los microorganismos de reaccin positiva a los colorantes cidos pueden hacerse gramnegativos por aumentar la alcalinidad.

4. Los microorganismos de reaccin positiva a los colorantes bsicos pueden hacerse gramnegativos por aumentar la acidez. 5. En la zona isoelctrica caracterstica de cada especie es muy escasa la tendencia a retener cualquier colorante. 6. Parece estar bien demostrado que las protenas de las bacterias no son simples, sino ms bien una dbil combinacin de sustancias protenicas con otras lipoideas o

7. La materia grasa extrada de los microorganismos grampositivos difiere de la obtenida de los microorganismos gramnegativos, en que la primera contiene una proporcin mucho mayor de cidos no saturados que muestren gran afinidad por los agentes oxidantes. Todos los mordientes (como el yodo) empleados en la coloracin Gram son oxidantes; su efecto, en general, consiste en dar a la sustancia oxidada un carcter ms cido. Esto aumenta la afinidad de un microorganismo por los colorantes bsicos.

8. El cambio de respuesta a la coloracin de Gram con el tiempo es propio, sobre todo, de los microorganismos dbilmente grampositivos cultivados en los medios que contengan sustancias capaces de fermentar, y cuya reaccin se vuelve cida en el curso del desarrollo.

Teora de Libenson y McllroyLa permeabilidad de la pared celular al violeta cristal, la escasa solubilidad del complejo de yodo y colorante en alcohol y acetona, y el libre acceso del disolvente al complejo constituido, son los principales factores que intervienen en el mecanismo de esa coloracin.

Bacillus

Enterobacteria

Bacillus + E. coli