Conocimientos básicos para la tinción de citología cérvico

  • Published on
    01-Jun-2015

  • View
    17.390

  • Download
    0

Embed Size (px)

Transcript

<ul><li> 1. Conocimientos bsicospara la tincin de citologa cervico-vaginalManual de tincin Cit. Claudia Elizabeth Mares AlatorreSeptiembre del 2008Anlisis del procedimiento de tincin para la citologa cervico-vaginal, en una visinglobal.</li></ul><p> 2. Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginalSeptiembre del 2008Introduccin.Este esun trabajo de investigacinespecialmente elaborado a peticin de laDra. Ana Mara Gallardo Muiz. Directoradel Laboratorio Regional de CitologaExfoliativa del IMSS seccin Jalisco.Esperando sirva de apoyo en la tcnica delprocedimiento de tincin de citologascervico-vaginales.2 3. Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008Polticas de operacin, normas y lineamientos.La Norma Oficial Mexicana NOM 014 SSA2-1994, para la prevencin, deteccin,diagnstico, tratamiento y vigilancia epidemiolgica (modificada 2006), es un documentotcnico de observancia obligatoria para todas las unidades de los sectores pblico, socialy privado en el mbito nacional, y las actividades y tareas en el laboratorio de citologaencuentran su sustento bsicamente en ella.La vigilancia para la aplicacin de los lineamientos respecto a la tincin y montaje en loslaboratorios de citologa crvico-uterina corresponde a la Secretaria de Salud tanto delnivel federal, como estatal, en sus respectivos mbitos de competencia.El director o coordinador del laboratorio deber verificar que el personal encargado dela tincin y montaje de las muestras citolgicas realice las actividadescorrespondientes.El incumplimiento de estas polticas y normas se sancionar conforme a la Ley Federalde Responsabilidades de los Servicios Pblicos.Propsito.Realizar un proceso de calidad, el tcnico en tincin o el citotecnlogo capacitado parala tincin y montaje de las muestras citolgicas.Campo de aplicacin.La coloracin descrita se aplica a las laminillas portadoras de muestras de frotis crvicovaginal para realizar el diagnstico citolgico.Requisitos para una tincin de calidad.El procesamiento manual de las muestras de frotis cervical fijado comprende lossiguientes sub-pasos:Reparacin ocasional de las lminas quebradas aceptadas.Preparacin y manejo de la batera de tincin.Tincin de las muestras.Montaje de las muestras.Distribucin de las lminas en las bandejas.La tcnica ser exitosa si: Todas las lminas aceptadas son procesadas en el tiempo establecido y se mantiene su integridad (no se quiebran) e identificacin durante el procesamiento. Todas las lminas estn teidas en forma apropiada lo que significa: I.Una buena definicin del detalle nuclear.II.Una transparencia del citoplasma. III.Una diferenciacin celular. Todas las lminas estn montadas adecuadamente, lo que significa que el frotis est protegido de la sequedad del aire, encogimiento y de desteirse por la oxidacin y, adems, proporciona una imagen transparente en el microscopio.3 4. Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginalSeptiembre del 2008 Las bandejas para los citotecnlogos estn preparadas correctamente lo que significa que contienen el nmero de lminas que corresponde, estn libres entre s (no pegadas), y colocadas en el orden correlativo del nmero de registro citolgico. Los insumos involucrados en el procesamiento de las muestras se usan eficientemente. El personal se mantiene libre de problemas de salud asociada al trabajo en la sala de procesamiento de muestras.rea de tincin.Caractersticas: Fsicamente separada de otros espacios. Con una excelente ventilacin hacia el exterior, ya que debido a los contaminantes qumicos, es un rea de alto riesgo. Sealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro. Con regadera anti-incendios y extintores. Campana de extraccin de gases tanto para la tincin, como para el montaje. Se recomienda que los insumos sean de buena calidad. Contar con un rea de bodega protegida de incendios para los reactivos y tinciones inflamables. La sala debe contar con un sector de lavado, equipado con lavadero.Los recursos de una sala de procesamiento manual se clasifica en:a. Mobiliario.b. Equipos.c. Insumos.Mobiliario y equipos del rea de procesamiento de muestras.Mobiliario.Lavatorio dotado de llaves de agua potable con filtro de agua, en loposible de acero inoxidable.Mesn de acero inoxidable de 190 x 70 x 90 cm. donde esta montado ellavatorio.Mesas altas de laboratorio de 190 x 70 x 90 cm. en lo posible, de aceroinoxidable.Estantes con vidriera para insumos.Sillas.Equipos e insumos.Campana de extraccin de gases.Horno de secado de lminas (opcional).Mechero de Bunsen.Cronmetro.Cubetas de tincin de 1000 ml. con tapa.Gradilla de tincin para laminillas.4 5. Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginalSeptiembre del 2008 Bandejas para lectura de laminillas con capacidad para 60 y de 10 laminillas por corrida cmodas. Probetas graduadas de 1000, 500, 100 y 10 ml de vidrio. Frascos de Erlenmeyer de Pyrex de 1000 y 2000 ml. Vasos de precipitado de Pyrex de 10, 100 y 1000 ml. Embudo de plstico. Pipetas graduadas de 10 ml. Garrafn de agua destilada. Papel filtro Whatman no. 4 Frascos de vidrio color oscuro para almacenamiento 1000 ml. Gasa para montar y limpiar laminillas. Balanza. Pinza pequea. Lpiz con punta de diamante. Lminas portaobjetos de vidrio de 75 x 25 x 0.6 a 1.2 mm. Laminas cubreobjetos de vidrio de 50 x 24 x 0.25 mm. Guantes desechablesInsumos. (Colorantes y reactivos.)Hematoxilina de Harris.Colorante OG 6Colorante EA 50Acido clorhdrico fumante.Etanol 96%Etanol 100% CH3CH2OHXilol. C6H4(CH3)2Medio de montaje. (resina sinttica para extendidos, blsamo de Canado liquido para montaje).Otros (carbonato de litio, hidrxido de amonio, cido Fosfotngsticico oreactivos para hacer colorantes)Campana de extraccin de gases.La campana de extraccin de gases generalmente tiene una velocidad de 100 pies porminuto. Se usa para los gases y vapores riesgosos generados al interior del espacio dela campana sean capturados antes de entrar a la zona de respiracin del operador. Sirvepara reducir la exposicin a contaminantes areos. Tanto la batera de tincin como elmontaje de lminas requieren campana de extraccin de gases.Cubetas de tincin.Las cubetas de tincin grandes permiten disminuir significativamente el tiempo detincin. Se recomienda utilizar cubetas de vidrio o de buen acero inoxidable diseadasespecialmente para tincin citolgica o histopatolgica. Al contar con tapas hermticasdisminuye considerablemente la evaporacin de los colorantes y alcoholes.Material de laboratorio.5 6. Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginalSeptiembre del 2008La cantidad de material de laboratorio como probetas, embudos, mecheros, etc., varansegn si se compran colorantes listos para usarse o se compran los ingredientes paraprepararlos.Portaobjetos y cubreobjetos.Conviene comprar material de vidrio de buena calidad.Insumos.En cuanto a insumos, los Laboratorios de Citologa tienen distintas modalidades deadquisicin de los insumos para el procesamiento de las muestras y de dicha modalidaddependern los insumos especficos requeridos. Las cantidades necesarias de insumosson afectadas por el rendimiento de la batera de tincin.6 7. Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008Principio y ventaja del mtodo de tincin de Papanicolaou.La tincin de Papanicolaou es un mtodo de tincin poli crmico que consta de unatincin nuclear y un contraste citoplasmtico. Tiene como ventaja: a. Una buena definicin del detalle nuclear, evidenciando el patrn de cromatina de las clulas. b. Un aspecto transparente de los citoplasmas y una diferenciacin celular, que permite apreciar grados de maduracin celular y actividad metablica.Es un mtodo basado en la diferenciacin de color de los diversos componentescelulares, se aplica a los diversos tipos celulares para el diagnstico de cambiosmalignos y la tipificacin celular.La tincin de Papanicolaou tiene cuatros pasos principales: Fijacin (realizada al momento de tomar la muestra). Tincin del ncleo con la hematoxilina. Tincin del citoplasma con Orange G y EA. Aclaramiento.La tincin de Papanicolaou usa tres colorantes: Hematoxilina. OG 6 EA 50Los pasos de la tincin estn entremezclados con soluciones que hidratan, deshidratany enjuagan las clulas.Coloracin bsicaColoracin cida.Hematoxilina de Harris Eosina. Orange G.Tincin.Es importante sealar que ste es un procedimiento que tiene variaciones e inclusopreferencias personales en la coloracin. Enjuague. El enjuague se realiza con agua corriente y/o agua destilada, pero siempre hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 6.5 y 7.Hidratacin.La hidratacin antes del colorante de hematoxilina puede ser: Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80-70-50 % Abrupta, sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de alcohol y al agua directamente. 7 8. Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginalSeptiembre del 2008 Tincin del ncleo. Existen dos mtodos para teir el ncleo: Mtodo progresivo. Se tie el ncleo con la intensidad de color deseada. Mtodo regresivo. Se sobre-tie con hematoxilina no acidificada, luego se remueve el exceso de tincin con cido clorhdrico diluido.Despus de la hematoxilina, las laminillas se lavan en agua.Tincin del citoplasma. Orange G 6, es una tincin monocromtica yEA 50, es una tincin policromacompuesta. Colorante. Elementos celulares. Hematoxilina de Harris.Afinidad por la cromatina.Tie el ncleo. OG 6 Tie la queratina.Penetra rpidamente al citoplasma. EA 50Tie el citoplasma de las clulasescamosas cianoflas y eosinoflas.Nuclolos y cilios. Aclaramiento. Es el paso final de la tincin y produce transparencia celular. Se suele usar Xilol como solucin aclaradora. Montaje. Objetivo del montaje. Es la unin del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el rea bajo el cubreobjetos para: Obtener una muestra cubierta. Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del material celular. Sellar, evitando as la oxidacin de la muestra.Caractersticas del medio de montaje.1. Debe ser soluble en el agente aclarante.2. Debe tener un ndice de refraccin que coincida con la muestra y el cubreobjetos, logrando una imagen lo ms transparente posible.3. Debe tener un pH neutro.8 9. Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginalSeptiembre del 2008Preparacin de soluciones.Fundamentos.Las soluciones son mezclas homogneas de dos o mas sustancias. Una solucin es unamezcla de un soluto en un disolvente, entendindose por soluto la sustancia que esta enmenor proporcin y disolvente la sustancia que esta en mayor proporcin.Existen soluciones solidas, liquidas y gaseosas.Tipos de soluciones:Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de solucin esnecesario conocer la concentracin de nuestra solucin: las cantidades relativas desoluto y disolvente.Si el soluto se encuentra en exceso con respecto a la cantidad de disolucin deldisolvente se tendr una solucin saturada.Una solucin saturada permite definir con precisin la solubilidad de un slido en unliquido.La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para disolverse en unliquido. Puede expresarse en: moles por litro. Gramos por litro. Porcentaje de soluto/disolvente.Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energa porque las partculas delsoluto y del disolvente se atraen.Soluciones empricas:Son aquellas en las que las cantidades de soluto o de solvente se conocen en formarelativa pero no exacta. Estas soluciones se utilizan principalmente en anlisiscualitativo y dentro de estas se encuentran: Solucin diluida: Formada por una mnima cantidad de soluto en relacin de la cantidad de disolvente.Ejemplo: solucin de HCL al 5% Solucin saturada: Es la que a la temperatura ambiente del disolvente disuelve el mximo del soluto posible.Ejemplo: solucin saturada de Li2CO3 (carbonato de litio). Solucin sobresaturada: Es aquella que contiene mas soluto del indicado por la concentracin de equilibrio.Ejemplo: cuando en la solucin saturada de Li2CO3, al prepararse seagrega una cantidad mayor de carbonato de litio de la requerida.9 10. Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Macroscpicamente observamos una solucin mas blanquecina y en el fondo del recipiente se observan grnulos de Li2CO3 que no se disolvieron por la sobre-saturacin.Para preparar este tipo de solucin se debe disolver el soluto a una temperatura mayorque la temperatura de equilibrio.Soluciones de concentracin conocida.Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la cantidad deldisolvente o de solucin. Este tipo de soluciones se utilizan en anlisis cuantitativo ydentro de estas se encuentran:Solucin porcentual. %Solucin formal. FSolucin molar.MSolucin normal. NPartes por milln. ppmFraccin mol. XSolucin titulo.TSOLUCIN PORCENTUAL.El porcentaje normalmente se utiliza para especificar la concentracin de la solucinpreparada al diluir un liquido puro en otro liquido. Por ejemplo, una solucin acuosa demetanol al 5% indica que dicha solucin se preparo al diluir 5 ml de metanol puro conagua hasta 100ml de solucinPreparacin de colorantesLa preparacin de los colorantes en el Laboratorio permite disminuir los costos de labatera de tincin.Preparacin de los colorantes para la citologa cervino-uterina adaptada de Koss.Hematoxilina de Harris. Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris. Hematoxilina cristales obscuros 5g Etanol 100% CH3CH2OH50 ml Sulfato de amonio y aluminio100 g Agua destilada 1000 ml Oxido de mercurio (HgO)2.5 g Procedimiento para prepara hematoxilina. a. Disolver cristales de hematoxilina en etanol. b. Disolver el sulfato de amonio y aluminio en agua destilada por calentamiento. c. Aadir la solucin de hematoxilina a la solucin de sulfato. d. Hacer que la mezcla anterior alcance la temperatura de 95C.10 11. Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginalSeptiembre del 2008 e. Retirar de la llama, aadir lentamente y agitando el xido de mercuriohasta que la solucin tome un color prpura oscuro. f. Introducir inmediatamente la solucin en un bao de agua fra. g. Filtrar la solucin cuando est fra. h. Guardar la solucin en frascos de color marrn oscuro y dejar en reposodurante 48 hrs. i. Para el uso: diluir la cantidad requerida con un volumen igual de aguadestilada y filtrar de nuevo.Esta preparacin tiene una duracin de meses a aos. Orange G 6Existen al menos dos frmulas para la tincin Orange G, una de las cuales es OG6 y la otra OG modificado. Se detallara a continuacin la frmula OG 6. Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6. Cristales de Orange G10 g Agua destilada100 ml Etanol al 95%1000 ml Acido fosfotngstico 0.15 g Procedimiento para preparar Orange G 61) SOLUCIN MADRE 1 Preparar una solucin acuosa de Orange G al 10% del siguiente modo: disolver 10 g de cristales de Orange G (color ndex Number 16230) en 100 ml de agua destilada. Agitar bien y dejar en reposo durante una semana antes del uso.2) SOLUCIN MADRE 2 Pre...</p>